沙田柚GDSL酯酶脂肪酶基因的鉴定及序列分析.PDFVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１１期 — ４５— 刘玉洁，郭丹妮，张　渝，等．沙田柚ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因的鉴定及序列分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１１）：４５－４８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．１１．０１２ 沙田柚 ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因的鉴定及序列分析 刘玉洁，郭丹妮，张　渝，覃信梅，李惠敏，秦新民 （广西师范大学生命科学学院／珍稀濒危动植物生态与环境保护教育部重点实验室，广西桂林５４１００４） 　　摘要：利用高通量测序技术对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序。通过差异分析得到ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶的 基因序列，该基因全长１３０６ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＵ１５９２７９），开放阅读框（简称ＯＲＦ）全长１１０４ｂｐ，共编码３６７个氨 基酸，编码的蛋白质分子量为４０．０９ｋｕ，理论等电点为６．４４，含有 １个与 ＳＧＮＨ蛋白相同的保守结构域（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｓ，简称ＣＡＳ）；ＧＤＳＬ基因在沙田柚自交１ｄ花柱中的表达量（简称ＲＰＫＭ）为４．６８，２ｄ为２．４１，３ｄ则迅速下 降到０．２７；在异交１ｄ花柱中该基因的表达量为４．４８，２ｄ迅速升高至７．４３，３ｄ仍维持较高水平为４．３７；系统进化树 显示，沙田柚ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因与甜橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）亲缘关系很近，属于同一进化分支。 　　关键词：沙田柚；ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因；序列分析；鉴定 　　中图分类号：Ｓ６６６．３０１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）１１－００４５－０４ 　　植物自交不亲和是指具有完全花且能够产生雌雄配子， 而得名，其中，Ｇ、Ｄ、Ｓ分别代表甘氨酸、天冬氨酸、丝氨酸。 雌蕊的柱头或花柱能特异性识别与自体基因型相同的花粉， 目前，尚未见ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因与植物授粉和自交不亲 ［１］ 导致花粉不萌发或花粉管停止生长的一种现象 。在高等 和性相关的研究报道。笔者对沙田柚自交和异交花柱进行转 植物中，据估计有超过一半的显花植物表现出自交不亲和性， 录组测序，通过对所测的Ｕｎｉｇｅｎｅｓ功能进行注释，获得了沙 ［２］ 这种现象在被子植物中尤其明显 。自交不亲和对植物保 田柚ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因，对该基因编码蛋白质的理化特 持遗传多样性以及杂种优势有着极其重要的作用。 征、在沙田柚自交与异交花柱中的表达进行了分析，旨在为深 目前，植物自交不亲和性的研究取得了较大进展。在茄 入研究ＧＤＳＬ酯酶／脂肪酶基因的生理功能以及沙田柚自交 科、车前草科、罂粟科，自交不亲和物种利用胞外核糖核酸酶 不亲和的分子机制提供依据。 ［３］ （简称Ｓ－ＲＮａｓｅ）阻止花粉管的生长 。在蔷薇科、玄参科 １　材料与方法 中，自交不亲和现象受 Ｓ位点相关的Ｆ－ｂｏｘ基因ＳＬＦ的调 ［４］ 控，这些基因能在花粉中特异性表达 。此外，一些基因也 １．１　试验材料 参与了植物自交不亲和反应，如参与防御的蛋白质可能在花 沙田柚试验材料取自广西壮族自治区桂林市灵川县潮田 粉萌发以及花粉管延伸到生长停止、破裂等一系列过程中发 乡大山口村果园１０年生结果树。取盛花期人工自交授粉 ［５］ 挥作用 。Ｄｉｓｔｅｆａｎｏ等发现与花粉特异性识别以及花粉管定 （沙田柚×沙田柚）和异交授粉（酸柚×沙田柚）后 １～３ｄ的 ［６］ 向生长有关的蛋白表现出多样化特性 。钙离子在调节花