4. CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE - farm.ucl.ac.be（4所示。）.pdf

4. CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE OBJECTIFS • Comprendre les principaux mécanismes de la séparation chromatographique • Savoir les utilisations principales de chaque type de chromatographie liquide • Comprendre pratiquement comment améliorer la séparation en chromatographie liquide • Identifier les constituants principaux d’un appareil de chromatographie liquide, y compris leurs caractéristiques importantes 4.1 Introduction On peut situer à 1958 le début de la chromatographie en phase liquide moderne avec l’introduction de l’analyse « automatique » des acides aminés (on parle alors de chromatographie « à grande vitesse », « sous haute pression », ou « à haute résolution », ou de préférence « de haute performance » [HPLC]. Ainsi, jusqu’à ces années 1958-1960, la chromatographie en phase liquide sur colonne (CL), bien qu’étant la plus ancienne des méthodes chromatographiques (TSWETT, 1906) avait été relativement peu utilisée en raison, principalement, de sa lenteur et de l’absence de détecteurs. La lenteur des séparations de la chromatographie en phase liquide classique − 1 était liée aux faibles vitesses d’élution (0.001 à 0.01 cm. s ), nécessaires en raison de l’efficacité médiocre des colonnes utilisées. Actuellement, on opère à des vitesses linéaires − 1 de la phase mobile de l’ordre de 0.1 à 1 cm.s , vitesses comparables à celles de la chromatographie en phase gazeuse dont elle est maintenant complémentaire. 4.2 Mécanismes d’interaction avec la colonne Selon la nature de la phase stationnaire (c’est-à-dire le phénomène physico-chimique sur lequel est basé la séparation proprement dite) on peut distinguer les mécanismes suivants : a) chromatographie d’adsorption b) chromatographie de partage c) chromatographie par échange d’ions d) chromatographie par exclusion de taille 55 4.3 Chromato