southern印迹杂交基本方法和主要步骤.docVIP

基本概念及原理 　　Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用 HYPERLINK /view/1035220.htm \t _blank 琼脂糖凝胶电泳分离经 HYPERLINK /view/48578.htm \t _blank 限制性内切酶消化的 HYPERLINK /view/758.htm \t _blank DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至 HYPERLINK /view/106555.htm \t _blank 尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记 HYPERLINK /view/102276.htm \t _blank 探针进行 HYPERLINK /view/107223.htm \t _blank 杂交，用 HYPERLINK /view/963570.htm \t _blank 放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量[1][2]。 基本方法及主要步骤 　　Southern印迹杂交的基本方法包括四部分，以下以植物southern印迹杂交为例。 　　（1）植物基因组DNA提取； 　　（2）DNA的限制性内切酶酶解、电泳和Southern转移； 　　（3）探针的标记和纯化； 　　（4）杂交、洗膜、检测以及去除膜上探针。 　　主要操作步骤： 　　1．琼脂糖电