热力法与酶解法提取鱼鳞胶原蛋白.docVIP

热力法和酶解法提取鱼鳞胶原蛋白的 工艺及性质研究 摘要 以草鱼鱼鳞为原料, 采用热力法和酶解法提取鱼鳞中的胶原蛋白, 用正交实验优化提取工艺, 分析所得胶原蛋白的性质。酶解法提取草鱼鱼鳞胶原蛋白的最佳工艺条件为:每克蛋白中加入7500U的Alcalase碱性蛋白酶, 鱼鳞:水=1:20 (w /v), 60℃水解4h, 胶原蛋白的水解度为6.43%。热力法提取的最佳工艺条件为, 鱼鳞:水= 1:20( w /v) , 121℃提取15m in, 提取率为45.47%。酶解法提取的胶原蛋白的黏度、吸水性和起泡性大于热力法提取的, 但保水性、乳化能力和乳化稳定性及泡沫稳定性小于热力法提取的。 鱼鳞胶原蛋白的性质 2.3.1 鱼鳞胶原蛋白的特征黏度 热力法和酶解法提取的胶原蛋白的特征黏度分别为0.360mL /mg 和0.508mL /mg。高分子溶液的特征黏度与分子量正相关, 以上结果表明, 酶解法提取的胶原蛋白的分子量比热力法的大。 2.3.2 鱼鳞胶原蛋白的吸水性 图1是鱼鳞胶原蛋白含水量与暴露时间的关系。图1表明, 延长暴露时间, 两种胶原蛋白的含水量均先增大后减少, 然后趋于平稳。平稳时酶解法和热力法提取的胶原蛋白的吸水量分别为0.11g /g 和0.08g /g。酶解法提取的胶原蛋白吸水性较高, 可能是该法提取的胶原蛋白暴露的亲水基团较多。 2.3.5 鱼鳞胶原蛋白的起泡性及泡沫稳定性,酶解法提取的胶原蛋白的起泡性明显高于热力法提取的, 前者可达70% 以上, 后者只有约30% 。延长静置时间, 两种胶原蛋白的泡沫均明显减少, 且酶解法提取的胶原蛋白的泡沫消失得更快, 说明其泡沫稳定性较差。 鱼鳞胶原蛋白 提取技术及其应用 1.2.1 传统提取方法传统的制备胶原蛋白的工艺是：原料→预处理→酸处理→碱处理→熬胶→胶液过滤→浓缩→切片→干燥→成品。将鱼鳞洗净，必要时要进行脱脂脱色，然后用盐酸(pH 在4～5)浸泡进行脱钙处理，直到鳞片柔软透明，时间大约为2～3 周；取出洗净后浸灰15～20 d，主要是使得原料组织疏松。洗净后放在60～70 ℃夹层锅中加热2～3 h 熬胶2～5 次，提尽为止。趁热转盘，凝固成胶冻，干燥后使含水量＜15%，即得成品。然而，传统的提取方法步骤繁多，耗时长且在提取过程中胶原蛋白流失较大，不适于大规模的生产。 1.2.2 酸提取法酸提取法即是利用酸在一定的外界环境条件下提取胶原蛋白，使用的酸有盐酸、柠檬酸、乳酸、醋酸等。张俊杰[10] 等利用乙酸从鲤鱼鱼鳞中提取胶原蛋白，经过响应面分析实验得到最佳提取工艺。在提取过程中发现，乙酸浓度过高反而会使胶原蛋白的提取率有下降的趋势，主要原因是较高的乙酸浓度会增加胶原蛋白的溶解速率，使提取液的黏度迅速增大，反而不利于后期的提取。刘晓宁[11]等用0.5 mol/L 的醋酸提取鱼鳞胶原蛋白，实验后的样品进行电泳时发现几乎没有条带。王信苏[12]等分别用醋酸、柠檬酸、乳酸来提取草鱼鱼鳞的胶原蛋白，结果表明柠檬酸提取胶原蛋白的得率最高，乳酸次之，醋酸最低。总体上说，酸提取胶原蛋白在前处理中不能用酸进行处理，因而有部分杂蛋白难以去除，在后续提取得到的胶原蛋白含杂蛋白较多，从而就增大了胶原蛋白纯化的工作量。酸提取方法步骤过于繁琐，在常温下提取，大量胶原蛋白损失。 1.2.3 热水提取法热水提取就是原料经过各种前处理后在一定条件下用热水浸提，从而得到水溶性胶原蛋白的方法。李闻欣[13]等在研究鱼鳞水法制胶的实验中得到鱼鳞水法制胶的最佳温度在60～70 ℃。温度高些有助于提胶，但温度过高抽提率还有所下降。超过70 ℃后，所制得的鱼鳞胶的固含量反而会有降低的现象，随着固含量的降低，鱼鳞胶的折光率和增比黏度都会降低，导致鱼鳞胶的质量有所下降。液比(鱼鳞与水的质量比)越小，所制得的胶黏度越高，鱼鳞胶的质量也相对好；可是液比太小抽提胶困难，抽提率小。因此抽提鱼鳞胶的液比以1∶1～1∶1.5 为最好。钱曼[14]等在比较热力法和酶解法提取鱼鳞胶原蛋白中发现，热力法的提取率比酶解法高，鱼鳞∶水＝1∶20(w/v)、121 ℃提取15 min，得率可达到45.47%，并且热力法提取的胶原蛋白有较高的保水性、乳化能力和乳化稳定性及泡沫稳定性。但此实验存在一个问题，由于目前胶原蛋白特异性的定量比较困难，因此常采用蛋白质总量测定方法或总氮量测定方法，而胶原蛋白对热比较敏感，在40 ℃以上的变性过程中，胶原蛋白的三螺旋结构被破坏，其中的氢键和疏水键断裂；温度升高到60 ℃以上，某些共价键被破坏，发生降解；到125～127 ℃以上，蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸以及酪氨酸等氨基酸残基被破坏，脱氨、脱水[2]。因此，在实验中测得应该是变性后的胶原蛋白的总氮量，由此计算出的提取率就不准确。 1.2.4 酶提取