家禽种蛋(胚胎)注射的研究进展.docx

家禽种蛋（胚胎）注射技术的研究进展西南大学荣昌校区动物科学系13级动科4班卢燕梅 222013602022163摘要：家禽种蛋注射技术，是指对一定胚龄的家禽胚胎进行疫苗接种注射，将一些外源物质注射到家禽种蛋中，使雏禽在出壳时至出壳后几天就具有特异性主动免疫力。这一项技术因能避免雏禽早期感染特定传染病，已经被越来越多的应用到了实际生产中。关键词：种蛋 免疫注射 免疫力 注射操作家禽种蛋（胚胎）注射免疫与孵化出雏后预防免疫相比较，其优点在于：提早免疫，应激反应低，注射精确且一致，劳动力成本低，注射用途广，疫苗污染少等。一．家禽种蛋注射的常规方法1 卵白注射 在鸡胚 10 d 时，尿囊绒毛膜已将卵白完全覆盖， 找不准卵白注射位点， 故卵白注射一般在 2～9 d 进 行。 且因卵白离胚胎较远，不会对胚胎产生太大的应 激作用，可用于较精确的定量研究，加之操作方便，应 用比较广泛。 但外源物质注射到卵白后，会与卵白内 的其它营养物质混合， 可能不会立即被胚胎吸收、利 用，因而可能无法立即反映注射液的作用效果，所以 一般取样的时间是在注射后 3～7d 开始， 而且最好尽 可能多地在不同发育时点取样，或者在某一时段连续 取样。 注射操作时要注意避开血管，针头插入 0.5 mm 即可，以降低可能造成的损伤和应激，注射液体积一 般在 0.1～1.5 mL 左右，不宜过高。2 卵黄囊内注射卵黄是胚胎发育的重要营养来源，卵黄囊内注 射的外源物质能较好地被胚胎吸收。 鸡胚发育到 18～21 d 时，卵黄囊被收入腹腔，因此卵黄囊内注射 应在 18 d 前进行。 注射液一般配制成体积为 1.0 mL 左右的盐溶液， 注射前溶液要预热至孵化温度，在 注射操作上要尽可能地熟练、细致，降低系统误差。 3 羊膜腔注射羊膜腔是离胚胎最近的腔室，注射到羊膜腔的 外源物质，利用效率高；而且羊膜腔内的营养物质 可提供给整个发育期的胚胎， 没有注射时间的限 制。 但羊膜腔处于胚蛋内部的中心，注射操作上有 一定难度；而且腔内液体直接与胚胎相连，注射后 对胚胎发育会产生较大干扰，阻碍了它的应用。 采用该注射方法时，要先选择大小、形状相似的胚蛋， 再根据蛋形指数、胚蛋结构特点确定注射角度和深 度，注射液体积一般不高于 1.5 mL，注射前溶液要 预热等。4 尿囊注射尿囊注射运用得最早、最成熟，但尿囊内营养 成分较少，且利用效率有限。 故尿囊注射在外源性 营养因子、生长因子对胚胎生长发育的研究中运用 较少。 鸡胚在 19 d 开始肺呼吸，尿囊绒毛膜开始萎 缩，因此尿囊注射应该在 19 d 前进行。 尿囊绒毛膜 血液循环可以供给胚胎发育的部分营养物质（如吸 收蛋壳中的钙和磷）， 但胚胎发育的主要营养来源 是卵黄和卵白，所以，用尿囊接种法培养病毒，在供 给病毒繁育所需营养的同时，不会出现因过多消耗 胚胎营养，导致胚胎的过早死亡。 这样就可以达到 在一定时间内培养病毒的目的。 后来的弱毒疫苗的 制备、胚胎早期免疫都是根据此原理进行的。 5 尿囊血管注射一般胚蛋注射，都会力求避开血管，以降低对 胚胎的直接应激。 所以，采用血管注射时，溶液理化 条件的控制要更加精细， 包括前文提到液体体积、 温度、渗透压等。 同时，注射操作要熟练、谨慎，不可 过多的刺破血管。 尿囊血管在 10～17 d 较为粗大、清 晰，因此注射操作多集中在这段时间。 尿囊血管注射后的物质胚胎吸收快、 利用率 高， 可以快速的检测到外源因子对部分敏感指标 （如能量水平、激素水平等）的变化，从而及时衡量 注射因子的作用效果，这是在该位点注射的最大优 点。 该法尤其适合注射多肽类外源物质，因注射到 血管后被分解、转化的少。 有研究者将 50 μL 不同含量水平的抗脂肪细胞单克隆抗体（Mab）溶液注射到 15 d 的尿囊血管 中， 发现 0.2mg 的 Mab 注射组的个体在 6 周龄腹脂 重降低了 28%， 且出壳后体重和生长水平不受影响。 该研究为降低家禽腹脂提供了一条新途径。 6 气室注射气室注射的外源物质能通过渗透作用被胚胎 吸收利用，3～18 d 是适宜的注射时间。 因为鸡胚在 19 d 后尿囊绒毛膜开始萎缩， 渗透作用开始减弱。 气室注射可最大限度地降低因注射液体和操作对 胚胎产生的应激，且操作更为简单、方便。 但是，气 室内物质的吸收效率较其它注射方式差，吸收利用 量不易被衡定，易受环境条件影响，故只能做出定 性的判断，无法满足精确、定量的研究需要。二．种蛋注射技术与传统免疫的比较对于鸡胚而言，有研究认为，在鸡胚发育到第18天，其免疫系统已经基本建立，能够对某些抗原产生较好的免疫应答。家禽胚胎注射技术的成功周瑶因素有：第一，在鸡胚发育过程中，可以接受注射的最早时间点，注射具有生物活性的疫苗和其他可以注射的物质，因此