植物病理试验仪器及无菌操作.PDF

第2章 植物病理實驗儀器及無菌操作 一、目的： 認識與操作實驗常用的儀器，及無菌操作觀念。 二、參考文獻： 1. 劉嵋恩 譯. 植物病理研究法. 484頁. 茂昌圖書有限公司. 台灣台北. 2. 東吳大學微生物學系網站資料 .tw/micro/microbe-exp/exp_website/Sterile.htm 3. 金車股份有限公司員山研究所 .tw/equipment.html 三、實驗室常見儀器： 1. 高壓滅菌器（釜、鍋）（autoclave ）： 利用蒸汽提升桶內溫度及壓力，達 到高溫高壓滅菌的目的（一般為 121℃，1.2 kg / cm² ）。其他重要功能：滅菌 時間及溫度可調整、滅菌完成自動警報停機、具有空焚防止、超溫警報功能。 主要裝置：總開關、起動鈕、壓力錶、定時器、指示燈、消毒乾燥開關、排 水閥、排氣閥、安全閥、操作完成及過熱時自動斷電附警報通知、溫度控制 器、壓力控制器、排水管 … 。 桌上型高壓滅菌器 直立式高壓菌器 大型高壓滅菌器 大型高壓滅菌器 圖1 、各種常見之高壓滅菌器。 2. 烘箱（Oven ）：利用高溫（乾熱）達到滅菌的目的（一般為180℃ 1-3小時）。 主要功能：滅菌時間及溫度可調整、滅菌完成自動警報停機、超溫警報功能。 一般適用於玻璃器皿或其他耐高溫且須要乾燥條件之用具。 乾熱式烘箱 乾熱式烘箱 圖2 、常見之乾熱式烘箱。 3. 無菌操作台（Larminar flow ）： 利用過濾篩網去除0.3 μm以上之塵粒及微生 物 ，效率高達99.97% （含）以上。其他重要功能：紫外燈（維持廂內及操作 台上的無菌狀態）。實驗進行前須以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以75% ethanol 擦拭無菌操作抬面，並開啟無菌操作台風扇運轉 10 分鐘後，才開始 實驗操作。一般可分為3級：第一級(Class Ⅰ) ：分為水平式和垂直式，兩者 的氣體流動的方向不同。可在此等級操作台上操作培養基的配製及微生物或 細胞株的培養。第二級(Class Ⅱ) ：操作台氣體流動的方向為垂直式；向外界 排氣的排風口有一層pathogen trap filter過濾排出的廢氣。可在此操作台執行 動物及人類細胞和腫瘤細胞培養，和不可讓含有害之微生物釋出之標本操 作。第三級(Class Ⅲ) －此無菌操作台為一隔離的空間，經由與操作台隔離的 手套操作，而進出此操作台的空氣接經過過濾。物品放進此操作台前須先滅 菌，操作後直接由密閉通道送入滅菌。可在此操作台進行可的人類病原菌 （特 別是病毒）之研究。 水平式無菌操作台（桌上型） 水平式無菌操作台（落地型） 垂直式無菌操作台（桌上型） 垂直式無菌操作台（落地型） 隔離式無菌操作台 落地型排煙櫃 圖3 、各種常見之無菌操作台。 4. 淨水製造機： （1） 逆滲透水製造機—第一道5微米PP聚丙烯纖維濾芯：可有效去除水 中泥沙、鐵鏽、雜質等固體沈澱物。第二道顆粒活性碳濾芯：可除 去自來水中之異味、臭味、氯、漂白劑、其他有害之化學毒物。第 三道１微米PP聚丙烯纖維濾芯：孔徑１微米的過濾芯，可有效過濾 更細小之雜質、微粒、以防護堵塞。第四道超微孔徑逆滲透膜：利 用逆滲透原理，將水加壓，使純淨的水分子穿透薄產生純水，同時 將不能穿透膜之各種質排放。孔徑0.0001 micron ，去除率達90% 。 第五道活性碳後處理濾芯：為精密活性碳，避免二次污染。 （2 ） 蒸餾水製造機—主要是利用加熱煮沸的方法，將水蒸發後再凝結， 以達到去除水中雜質的目的。因此，一般水中沸點比水高的污染