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中药独活中总香豆素高通量研究方法建立[摘要]建立中药独活中总香豆素的含量测定的高通量的分析方法。方法：采用紫外分光光度法，检测波长为320nm对中药独活药材中的总香豆素进行测定。结果：采用该方法可准确测定中药独活药材中总香豆素的含量，蛇床子素在3.0－60μg／mL范围内，吸光度与浓度的线性关系良好(r＝0.9995)，样品平均回收率为98.1％，精密度RSD为0.27％，稳定性RSD为0.9％(2Ah)，重复性RSD为1.83％。结论：该方法简单、准确，可用于中药独活药材中总香豆素的含量测定。 [关键词]独活；总香豆素；紫外分光光度法；含量测定 [中图分类号]R282.5　[文献标识码]A　[文章编号]1007-8517(2011)09-0048-02 独活为伞形科植物重齿毛当归[Angelica pubescensMaxim f biserrata Shan et Yuan]的根，是一种常见的中药，具有祛风除湿，通痹止痛之功效，用于风寒湿痹，腰膝疼痛，少阴伏风头痛，风寒协湿头痛…。现代研究表明，独活含有数十种香豆素类化合物，如东莨菪内脂、伞形花内脂、二氢山芹醇、补骨脂素、二氢欧山芹醇乙酸酯，蛇床子素、异欧前胡素二氢欧山芹素等，其中蛇床子素含量最高。 目前，独活总香豆素含量测定方法主要以采用紫外分光光度法为主，但该种方法由于每次仅能1－3个样品，具有低通量的特点，不适合大量的样品检测。因此，本试验以蛇床子素为对照品，用多功能读板机，拟建立一种高通量的独活中总香豆素含量测定方法，为独活药材及饮片控制提供一种简单、快速、高通量的分析方法。 1、仪器与试药 AX－105十万分之一天平；BPl2IS万分之一天平(德国赛多利斯)；SB－1000YDTD超声清洗槽(宁波新芝科技股份有限公司，40KHZ)；微量多功能读板机(infiniteM200)；96孔板(Cos96ft－Coming 96 Flat Transparent)。 蛇床子素对照品(成都曼斯特生物科技有限公司)，甲醇(色谱纯)，无水乙醇(分析纯)，纯水，不同产地独活饮片购买于药材各地药材市场，经作者鉴定为伞形科独活。分别粉碎，过100目筛，密封保存，备用。 2、实验方法 2.1对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的蛇床子素对照品2mg，置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成400μg／mL的蛇床子素标准液。 2.2供试品溶液的制备 精密称取独活药材粉末0.125g，置10mL具塞试管中，加60％甲醇定容至10mL，超声40min，称定重量，声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 3、结果 3.1测定波长的选择 分别精确量取对照品溶液及供试品溶液各0.2mL，置于10mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，在波长为200－400m范围内扫描，对照品溶液和供试品溶液均在315－325nm范围内有明显吸收，吸收峰在320nm附近，故选择320nm作为测定波长。 3.2方法学验证 3.2.1标准曲线 精密吸取一定量蛇床子素标准液置10ml容量瓶中，加入甲醇稀释得到3、6、12、18、24、30、36、42、48、54、60μg／ml溶液。以甲醇为空白对照，绘制标准曲线：y＝0.0331x-0.0089(r＝0.9995)。结果表明蛇床子素质量浓度在3 60ug/ml范围内，呈良好的线性。 3.2.2精密度 精密吸取8μg／ml对照品溶液200μl，加入到96孔板中，320nm波长下测定吸光度，重复测6次，吸光度值RSD为0.27％。 3.2.3重复性 取同一批药材6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定总香豆素的含量为2.17％，RSD为1.83％，表明该方法重复性好。 3.2.4稳定性试验 取供试品溶液0.2mL，按标准曲线制作方法，分别在1，2，6，8，12，16，24h测定吸光度，考察样品24h稳定性。经计算，RSD＝0.87％，表明供试品溶液在24h内稳定。 3.2.5加样回收率试验 精密称取已知含量的独活样品粉末约0.05g，共6份，置10mL具塞试管中，分别加入质量为1086μg的标准品，按供试品溶液制备方法，制备含对照品的样本溶液6份，测定并计算，结果见表1，平均回收率为98.9％，RSD为3.00％。 3.3样品测定 精密称取不同来源独活饮片粉末，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液0.2mL，按标准曲线制作方法测定其吸光度。利用回归方程求出供试品溶液中折合蛇床子素的浓度(总香豆素)，并计算独活中总香豆素的