中药甲宁对自身免疫性甲状腺炎治疗作用实验探究.docVIP

中药甲宁对自身免疫性甲状腺炎治疗作用实验探究【摘要】 目的 研究中药甲宁对自身免疫性甲状腺炎治疗作用。方法 用0．05%碘化钠和福氏佐剂抗原乳剂进行造模，2周后加强免疫，以后每周加强免疫1次，至第6周结束[1-3]。正常对照组不做任何处理。各药物组即①~④组免疫后第3周开始灌胃给药，1次/d，均按每100 g体质量1 ml容积给药，⑤、⑥组大鼠给与等容生理盐水。第10周结束实验。取血(3 ml)，分离血清冻存(-80℃),测定甲状腺球蛋白抗体(TGAb)，甲状腺微粒体抗体(TPOAb)。测量的甲状腺的重量指数。甲状腺组织进行病理检查。结果 组织学示雷公藤组及甲宁大、中、小剂量组甲状腺病变程度均较模型组轻，差异有统计学意义(P0．05)。模型组大鼠重量及重量指数高于正常对照组和各给药组，差异有统计学意义。但各给药组之间差异无统计学意义。模型组大鼠血清TGAb、TPOAb水平明显高于正常组(P0．001)，而各给药组大鼠升高不明显。结论 表明甲宁、雷公藤对大鼠自身免疫性甲状腺炎有治疗作用。并且甲宁大剂量组的治疗效果明显优于雷公藤组(P0．05)，中、小剂量组差异无统计学意义。 【关键词】中药甲宁;雷公藤;自身免疫;甲状腺炎 1 材料 1．1 动物 SD大鼠，体重180~220 g，雌雄各半。河北医科大学实验动物中心提供，合格证号:DK0504-0001。 1．2 药品与试剂 甲宁，中药汤剂，主要有三棱、莪术、柴胡、五味子、炮甲株、何首乌、夏枯草、野菊花、女贞子等煎制而成，由河北省中医药研究院提供，药液浓度每毫升含生药量2．4 g，猪甲状腺球蛋白(Porcine Thyroglobulin,PTg,购自SIGMA公司)；完全福氏佐剂由福源生物制造；雷公藤片由三九企业集团三九黄石制药厂生产，批号:041007，为雷公藤提取物，每片含雷公藤甲素33 μg，用生理盐水研磨制成每毫升含雷公藤甲素1．5μg的溶液。TG、TPO抗体放射免疫试剂盒由北京福瑞生物工程公司提供，批号 1．3 仪器 γ放射免疫计数器，西安262厂生产，型号:FJ-2008P。 1．4 完全福氏佐剂及不完全福氏佐剂抗原乳剂的制备 将PTg用生理盐水配制成0．1%浓度的溶液，再将其与佐剂按?1∶1?(V/V)混匀，研制成油包水乳剂。每毫升乳剂中含0．5 mgPTg。 2 方法 2．1 实验分组 ①甲宁大剂量组(24 g/kg);②甲宁中剂量组(12 g/kg);③甲宁小剂量组(6 g/kg);④雷公藤组(15μg/kg);⑤模型组;⑥正常对照组，每组10只。 2．2 造模与给药 ①~⑤组大鼠每天予以饮用0．05%碘化钠，实验第15天后，于背部多点皮下注射完全福氏佐剂抗原乳剂0．2 ml(含PTg100 μg)进行初次免疫，2周后以不完全福氏佐剂抗原乳剂0．2 ml加强免疫，以后每周加强免疫1次，至第6周结束[1-3]。正常对照组不做任何处理。各药物组即①~④组免疫后第3周开始灌胃给药，1次/d，均按每100 g体质量1 ml容积给药，⑤、⑥组大鼠给予等容生理盐水。第10周结束实验。摘眼球取血(3 ml)，分离血清冻存(-80℃),处死动物，取双侧甲状腺组织，称重并计算每100 g大鼠体质量的甲状腺毫克数作为甲状腺的重量指数。之后，留取一侧甲状腺组织用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色。 2．3 甲状腺组织病理检查 HE染色的甲状腺组织切片，光学纤维镜下分别观察甲状腺实质及间质，包括滤泡大小、上皮形态、上皮及滤泡间淋巴细胞浸润程度。并参考Charveire的分类法[3]，将上皮细胞的淋巴细胞浸润分为以下几个等级:0级，0个炎细胞/张切片，记为0分；0级，0个炎细胞/张切片，记为1分；2级，1个炎细胞/10HPF(高倍视野)，记为2分；3级，1个炎细胞/5HPF(高倍视野)，记为3分；4级，1个炎细胞/2HPF(高倍视野)，记为1分；间质的淋巴细胞浸润程度(-)为0级，记为0分，(+)为1级，记为1分，(+)为2级，记为2分，(++)为3级，记为3分，(+++)为4级，记为4分，甲状腺淋巴细胞浸润程度=滤泡上皮间淋巴细胞浸润程度+滤泡上皮间淋巴细胞浸润程度。 2．4 甲状腺球蛋白抗体(TGAb)，甲状腺微粒体抗体(TPOAb)的测定 大鼠血清 TG、TPO抗体采用放射免疫试剂盒，并按试剂盒检测步骤进行TGAb、TPOAb水平测定。TGAb、TPOAb水平以抗体结合率表示。 2．5 统计方法 计量资料采用均值±标准差(x±s)表示，各组之间采用单因素方差分析，统计软件为STATA6．0,计数资料的多组间比较采用秩和检验(Kruskal-Wallis法)，检验水准α= 0．05