人原发性结直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型建立.docVIP

人原发性结直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型建立【摘要】 目的:建立人结直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型，探讨其生物学特性。方法:采用人原发性结直肠恶性淋巴瘤术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织块植入裸鼠结直肠粘膜层内，观察原位移植成瘤率，移植瘤的侵袭和转移率，进行形态学（光镜、电镜、免疫组织化学），染色体核型，流式细胞分析。结果:依据新的WHO恶性淋巴瘤的分类法，从4例结直肠淋巴瘤标本中筛选出一株人结肠（非霍奇金B细胞）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型HCBL-0301和一株人直肠（非霍奇金B细胞）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型HRBL-0302。移植瘤组织病理学均为非霍奇金（大B细胞性）高度恶性淋巴瘤，免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45阳性，CD3、CD7阴性。染色体众数范围55条～69条；流式细胞示DI值1.59～1.71，均为异倍体。HCBL-0301和HRBL-0302分别传至31代和27代，共移植裸鼠326只；自第3代起肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%，HCBL-0301多转移肝右叶，转移率为100%；淋巴结转移率和腹腔种植转移率为67.4%。HRBL-0302多转移左右肝叶，转移率为63.7%，淋巴结转移及腹腔种植转移率56.4%。人结直肠恶性淋巴瘤在裸鼠结直肠内自主侵袭性生长。发生血液转移、淋巴转移和腹腔内种植性转移。结论:HCBL-0301和HRBL-0302是首次建立成功的人结直肠恶性淋巴瘤裸鼠原位移植均出现自发性高转移模型。可用于结直肠恶性淋巴瘤的发病机理、侵袭和转移及实验治疗的研究。 【关键词】 结肠肿瘤；直肠肿瘤；淋巴瘤；肿瘤移植；肿瘤转移；疾病模型 【中图分类号】 R735 【文献标识码】 Ｂ 【文章编号】 1007-8231（2011） 07-0297-03 原发性结直肠恶性淋巴瘤临床罕见，占所有原发性结直肠恶性肿瘤的1.2%[1]。病因学和发病机制迄今尚未阐明[2]，手术是原发性结直肠淋巴瘤的主要治疗手段。但是，术后复发和转移是其主要死亡原因[3]。与大肠其他肿瘤相比基础和临床研究的深度和广度仍很受限[4]，缺少可供直接研究的肿瘤组织标本和实验研究的动物模型，建立高转移肿瘤动物模型是研究肿瘤转移生物学行为的前提，使人体外整体实验研究人类恶性肿瘤的自发转移成为可能。这也是在人体外研究进行性肿瘤的实验治疗的关键。为深入探讨结直肠恶性淋巴瘤的生物学行为，我们采用组织学完整的人结直肠恶性淋巴瘤新鲜组织块原位移植裸鼠，首次成功地建立起一株人原发性结肠恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型和一株人原发性直肠恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型，分别命名为HCBL-0301和HRBL-0302。这两株模型完整地重现了人结直肠恶性淋巴瘤的自然临床病理过程，且转移模式与临床病人相似。为结直肠恶性淋巴瘤的基础和临床研究提供了理想的动物模型平台。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1实验动物：BALB/C―nu/nu裸小鼠由中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院动物室提供。鼠龄3～5周，体重17～20克，雌雄兼用，在SPF（specific-pathogen free）条件下的本院裸鼠室内饲养。 1.1.2标本来源：4例经病理诊断为原发性结直肠恶性淋巴瘤，术中新鲜瘤组织标本由解放军第202医院和辽宁省肿瘤医院提供。 1.2方法 1.2.1标本处理：无菌切取的人结直肠恶性淋巴瘤活体瘤组织置入RPMI-1640培养液中，消除非瘤组织，剪切成1mm3组织小块，供移植用。 1.2.2原位移植与传代[5]：裸鼠在0.5%戊巴比妥钠（30mg/kg）静脉注射全麻下，取腹正中线切口，辨认结直肠，在结直肠的浆膜面向肠壁内做3mm切口深达黏膜层，以0/10无损伤缝合线，经切口将2粒1mm3瘤小块固定于肠壁黏膜层，0/7丝线缝合腹膜，0/5丝线缝皮。术后继续饲养，观察期为60-90天，当荷瘤裸鼠处于濒死状态时，取其中1只荷瘤裸鼠用颈椎脱位术处死，系统解剖，取出移植瘤。一部分瘤组织以原代移植方法行鼠间连续传代，每次传代5～10只不等；另一部分瘤组织液氮冻存备用，进行相关指标检测，其他动物以观察其肿瘤的生长、侵袭和转移。 1.2.3解剖学和组织学检查全部荷瘤裸鼠均经详细解剖学检查，测量肿瘤体积观察侵袭周围脏器情况；观察结肠上、旁、中间和终末淋巴结、直肠上动脉、肠系膜下动脉、腹主动脉周围淋巴结、肝和脾等各内脏有无肿瘤的转移。移植瘤组织，区域淋巴结和各脏器经10%中性福尔马林固定，石蜡切片，H.E染色，光镜观察。把整个肝脏切开全部包埋于石蜡，于不同平面切片10-20张，并观察肝转移情况。 1.2.4免疫组织化学染色采用LSAB法，对全部裸鼠结直肠肿瘤