高效液相色谱法测定珍黄片含量.docVIP

高效液相色谱法测定珍黄片含量[摘要] 目的:建立高效液相色谱法测定珍黄片的含量。方法:采用高效液相色谱法对制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量进行测定。结果:人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的线性范围分别为1.144～11.440 μg(r=0.999 9)、0.948～9.480 μg(r=0.999 9)和0.434～4.340 μg(r=0.999 8),平均回收率分别为96.46%(RSD=1.01%)、98.17%(RSD=1.02%)和96.27%(RSD=1.16%)。结论: 该方法简便、灵敏、准确,适用于珍黄片的含量测定。 [关键词] 珍黄片;含量测定;高效液相色谱 [中图分类号]R927.2[文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2009)07(a)-134-02 珍黄片由珍珠、牛黄、三七、黄芩提取物、冰片、猪胆汁等组成,具有清热解毒,消肿止痛的功效,主要用于咽喉肿痛,疮疡热疖[1]。为了更好地控制其质量,保证临床用药安全有效,本实验采用了HPLC法测定了制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量[2-5],方法简便、准确、可靠。 1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津LC-2010高效液相色谱仪,Intersil C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)。 1.2 试药 人参皂苷Rg1对照品(Ⅰ)(供含量测定用,批号:0703-9812)、人参皂苷Rb1对照品(Ⅱ)(供含量测定用,批号:110704-200217)、三七皂苷R1对照品(Ⅲ)(供含量测定用,批号:0745-200006)(中国药品生物制品检定所提供);珍黄片(北京因科瑞斯生物制品研究所提供);乙腈为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯。 2 定量分析 2.1 色谱条件 Intersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱见表1,检测波长203 nm,流速1.5 ml/min,柱温30 ℃,进样量10 μl,理论板数按Ⅲ峰计算应不低于2 000。在该色谱条件下,样品中被测成分能够达到基线分离,保留时间在15 min内,阴性无干扰,色谱图见图1。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对照品适量,加甲醇制成每1 ml含Ⅰ0.55 mg、Ⅱ0.45 mg和Ⅲ0.20 mg的混合溶液,即得。 2.3 供试品溶液的制备 取本品细粉适量(约1.5 g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,称定重量,加热回流提取2 h,放冷,用甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液25 ml,蒸干,残渣加1%氢氧化钠50 ml,分次溶解并移入分液漏斗中,用水饱和的正丁醇振摇提取5次(分别为30,30,20,20,20 ml),合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤至中性,每次25 ml,正丁醇液另器贮存,合并水液,用水饱和的正丁醇30 ml振摇提取,醇液与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加乙醚5 ml洗涤,弃去乙醚液,残渣挥尽乙醚,加甲醇溶解,并移至10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。 2.4 阴性样品溶液的制备 按珍黄片处方,除去三七药材,制备阴性对照样品。按“供试品溶液的制备”项制备阴性样品溶液。 2.5 线性关系考察 分别精密称取Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对照品适量,加甲醇溶解并稀释,制得浓度分别为1.144 mg/ml、0. 948 mg/ml和0.434 mg/ml的对照品溶液。分别精密吸取该溶液1、2、5、7、10 ml,置于10 ml的容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10 μl,连续进样2次,按上述色谱条件测定峰面积。以对照品进样量(X)为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,回归方程见表2。 2.6 精密度试验 取同一批供试品溶液,在上述色谱条件下连续进样5次,各样品峰面积的RSD分别为:Ⅰ1.38%,Ⅱ1.11%,Ⅲ1.96%,表明精密度良好。 2.7 稳定性试验 取同一批供试品溶液,在上述色谱条件下,分别于0,2,4,8,12,24 h测定,各样品在24 h内峰面积的RSD分别为:Ⅰ0.69%,Ⅱ1.00%,Ⅲ1.88%,表明样品在24 h内基本稳定。 2.8 重复性试验 取同一批样品,按拟定的方法平行测定6份,平均含量为Ⅰ8.21 mg/g,Ⅱ7.21 mg/g,Ⅲ1.97 mg/g,RSD分别为:Ⅰ0.82%,Ⅱ1.82%,Ⅲ1.91%,表明该方法的重复性较好。 2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量