新发传染病的病原体诊断技术研究进展.pdfVIP

·8· 新发传染病的病原体诊断技术研究进展 陈晓光，张娟，徐翮飞。张齐 山东国际旅行卫生保健中心，青岛266071 擒要：目的综述近年来新发传染病检验技术的发展历程及其最新进展。方法介绍了代表性差异分析(RDA)技术、基于保守序 列的聚合酶链式反应、eDNA文库筛选、随机PCR、高通量测序技术，重点介绍Roch公司高通量测序技术，并对其在卫生检疫的发展 前景做了展望。结果新一代高通量、快速和经济的DNA测序技术大大推进对传染病的诊断和新发传染病病原的发现，提高了对 传染病的预警和快速反应能力。结论新发传染病(如甲型流感、传染锉非典醴碲炎(SARs)和入高致病性禽流感)的爆发表明，加强 高通量的快速检测的新技术对传染病的诊断和新发传染病病原的发现具有重要意义。 关键词：新发传染病；代表性差异分析技术；基于保守序列的聚合酶链式反应；eDNA文库筛选；随机PCR；高通量DNA测序 新发传染病是指由新出现(发现)的病原体或经过变异 1．2基于保守序列的聚合酶链式反应ConsensusSequence 而具有新的生物学特性的已知病原体所引起的人和动物传 BasedPCP．) 染性疾病。30多年来，全球传染病流行十分严重，相继发现 1．2．1基本原理就是通过已知的一种生物和另一种生物之 了40多种新的传染病，包括一些对人类造成极大威胁的疾 间高度保守的DNA序列设计引物。用PCR的方法去扩增另 一种生物的未知DNA序列。此法在操作上比代表性差异分 病如艾滋病、传染性非典型肺炎(SARS)和人高致病性禽流感 等。带给人类巨大的惊恐，在突如其来的新发传染病面前，人 析和eDNA文库筛选要简单得多。当一种未知病毒与可能与 群没有免疫力，一时也往往找不到有效的预防、治疗和控制 另一种已知的病毒相似时，可以根据已知病毒的保守序列设 的办法，因而新发传染病较已知的传染病具有更大的危害 计引物，然后用PCR方法扩增出未知病毒的相应序列。 性。一旦某种传染病流行，及早诊断、明确引起该病的病原 1．2．2新型汉坦病毒发现1993年5月，在美国西南部爆发 体，制定隔离和消毒措施，切断传播途径，预防接种易感人 了一场高死亡率的急性呼吸道疾病，血清学试验中发现，病人 群，从而最大限度地避免该传染病扩散、控制疫情蔓延具有 的血清能与一些已知的汉坦病毒抗原起交叉反应，提示该病 十分重要的意义。鉴于可引起传染病的病原体种类繁多， 的病原体有可能是一种以前未能发现的新汉坦病毒。1993 并且不断发生变异，特别是新发传染病具有无法预测和暴 年Nichol等根据已知的汉坦病毒基因组M片断的包膜糖蛋白 发等特点。如何在第一时问对病原体作出诊断及分析成为 G2编码区的保守部位设计了PCR引物。用套式引物PCR的方 法扩增出一个278 各国学者研究的重点。以代表性差异分析(RDA)技术、基 bp的DNA片断。序列分析表明，与其他血 于保守序列的聚合酶链式反应、eDNA文库筛选、Random清型的汉坦病毒至少有30％的不同源性。在系统发生上与 Hill PCR等分子诊断方法在新发传染病的发现和诊断做出了贡 virus)最为接近，说明该病毒 IV型希望山病毒(Prospect 献，近来以高通量DNA测序技术为代表的分子技术的发展 是一种新的汉坦病毒”j。 及自动化仪器的应用已明显加快了新发传染病检验的速 1．3 cDNA文库筛选 度，下面就近年来新发传染病检验技术的发展历程及其最 1．3．1基本原理eDNA文库筛选常被用来检出RNA病毒的 新进展作一简要综述。 核酸。收集病毒颗粒(感染组织匀浆过滤，或者血浆超速离心