发色底物法检测原理.pdfVIP

发色底物法检测原理 首先人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的化合物，且化合物连接上产色物质，在检测过程中产色物质可被解离下来， 使被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。产色物质一般选用连接对硝基苯胺（PNA）。游离 的PNA 呈黄色，其测定波长选用405nm。在这一波长下，其它物质对光的吸收小于PNA 对光吸收的1％。具体检测方法即可采 用动态法、也可采用终点法。动态法即是连续记录样品的吸光度变化，算出单位时间吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的 变化来报告结果。终点法即是指在活性酶同产色物质作用一段时间后，加入乙酸终止反应，检测此段时间内吸光度的变化， 进而推算出待检酶的活性。凝血仪上多数采用动态法，因为它比终点法简单、结果更为准确。其优点主要表现在： 用酶学方法直接定量、测定结果准确、重复性好、便于自动化和标准化、所需样品量小。 凝血仪使用产色物质在检测血栓／止血指标时大致可分成三种模式。 ①对酶的检测： 即在含酶的样品中直接加入产色物质，因为酶可裂解产色物质释放PNA，监测由于PNA 释放而导致被检样品在405nm 处光吸收 的变化，就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测。 ②对酶原的检测： 要对某种酶原进行测定，必须先用激活剂将其激活，使其活化位点暴露，才可将产色物质上的PNA 裂解下来。加入的激活剂 必须过量，因为只有这样才能使酶原被全部激活，酶原的量才会同样品中酶的活性成一定的数量关系。样品中酶的活性可通 过PNA 释放，即样品吸光度的变化反应出来，由此则可推算出样品中酶原的含量。 ③对酶抑制物的检测： 首先往待检样品中加入过量对应的酶中和该抑制物，剩余的酶可裂解产色物质释放PNA，监测由于PNA 释放而导致光吸收的变 化，就可测出酶的活性，进而可推算出样品中抑制物的含量。如对抗凝血酶Ⅲ （AT-Ⅲ）等。 法国HYPHEN BioMed 公司生产的发色底物试剂,质量上乘,价格实惠! 发色底物 商品名 注册名 货 号 规 格 价 格 BIOPHEN CS-01(38) S-2238 229001 25mg ￥3000 Thrombin / （Factor IIa） BIOPHEN CS-01(81) - 229005 25mg ￥3000 BIOPHEN CS-11(32) S-2732 229011 25mg ￥2000 Factor Xa BIOPHEN CS-11(65) S-2765 229014 25mg ￥2000 BIOPHEN CS-11(22) S-2222 229015 25mg ￥3000 Activated Protein C (aPC) BIOPHEN CS-21(66) S-2366 229021 25mg ￥3000 Kallicrein BIOPHEN CS-31(02) S-2302 229031 25mg ￥2500 Plasmin / Plasminogen-SK BIOPHEN CS-41(03) S-2403 229041 25mg ￥2500 Factor IXa BIOPHEN CS-51(09) - 229051 25mg ￥2500 Urokinase BIOPHEN Cs-61(44) S-2444 229061 25mg ￥3000 tPA and broad spectrum BIOPHEN CS-05(88) S-2288 229091 25mg ￥2500 microfluidic device