环境工程微生物学试验-安徽建筑大学.PPT

环境工程微生物学实验 安徽建筑工业学院 环境与能源工程学院 鲍立宁 洪桂云 实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 实验目的 1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。 2．结合生物滤池生物膜及曝气池活性污泥的观察，认识原生动物、菌胶团等微生物的形态，并学习测量微生物大小的方法。 实验原理 由于细菌的细胞小，菌体透明，肉眼无法看到的微小生命体。我们可以借助显微镜来进行观察。显微镜的种类很多，但基本构造可分为两大部分：一是机械装置，二是光学系统。细菌的简单染色就是根据细菌对不同染料的亲和力不同，采用单一的一种染料，对细菌的涂片进行染色的方法，从而能借助显微镜更清楚的观察到其形态结构。 显微镜的使用 1．观察前的准备 (1) 置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约3-4cm, 镜检者姿势要端正，左眼观察，右眼便于绘图或记录。 (2) 调节光源、光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。 2．低倍镜观察 （1）低倍镜旋到镜筒下方，旋转粗调节器,镜头与载物台相距0.5cm。 （2）打开聚光器，使之与载物台同样高度。 （3）左眼看目镜，观察光源强弱，使全视野内均匀明亮。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器，旋转反光镜调节光线。 3．高倍镜观察 （1）将高倍镜转至正下方，在转换物镜时，需用眼睛在侧面观察，避免镜头与玻片相撞。 （2）如果低倍镜重调对，换高倍镜时基本可以看到目的物，若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。 （3）找到最适宜观察的部位后，将此部位移至视野中心，准备用油镜观察。 观察所制备的微生物标本玻片，画出所见原生动物、细菌、真菌等微生物的形态草图。 实验二 活性污泥中原生及微型后生动物观察和数量的测定 实验原理 测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法、平板计数法和光电比浊计数法。 显微镜直接计数法 将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，又称微型动物计数板，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 微型动物计数板的构造 微型动物计数板制作方法： 采用厚质玻璃割成9cm长，4cm宽的长方块，玻璃厚度以0.3一0.4cm为宜。利用氢氟酸腐蚀法，使玻板中央刻上10×l0＝100个小方格，小方格的大小没有严格规定，只要一片大号盖玻片能盖满格子有余和便于在显微镜下计数就可以了。用大号盖玻片切成宽约0.7cm的玻条，用阿拉伯树胶粘在计数用的小方格的四周，使呈一圈凸起的边框。这样，就制成了一块微型动物计数板，如图8—5所示。 关于氢氟酸腐蚀法划方格的方法是先将玻璃表面涂一层薄面均匀的石蜡，然后用尖针在石蜡层上刻出所要求的方格，再以氢氟酸蒸汽进行重蒸。 实验器材 显微镜、计数板、活性污泥 、盖玻片、吸管、吸水纸。 计数方法 1．将活性污泥法曝气池混合液轻轻搅拌均匀； 2．取洗净的滴管一支，吸取摇匀的混合液或己稀释的混合液加一滴到计数板的中央方格内，然后加上一块洁净的大号盖玻片，使玻片的四周正好搁在计数板四周凸起的边框上。 3．用低倍显微镜进行计数，同时记录各种动物的活动能力、形态结构等。原生动物中有不少种类是群体，须将群体和群体上的个体分别计数。 4．计算：设在一滴水中测得钟虫30只，则每ml混合液中含有钟虫30×2×20＝1200只，如测得轮虫10只，则每毫升混合液含轮虫10×2×20＝400只 结果记录 实验目的 1.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 2.掌握培养基和无菌水的制备方法。 3.掌握高压蒸气灭菌技术。 实验原理 培养基是用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素外还应具有适宜的酸碱度〔pH值〕、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。 实验器材 (1)药品和试剂：牛肉膏、蛋白陈、NaCl、10％NaOH溶液、l0％盐酸溶液、琼脂、水等。 (2)器材：小烧杯、小铝锅、天平、牛角匙、1000mL刻度烧杯、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉花。高压蒸气灭菌锅、烘箱。 实验步骤 一、玻璃器皿的洗涤和包装 清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。 二、培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 （一）培养基配方： 牛肉膏2.5g 蛋白胨5.0g、NaCl2.5g、琼脂10.0g、自来水500mL、pH7.2-7.4。 （二