温度对蟾蜍冬眠时的血糖含量以及肺的影响.docVIP

蟾蜍冬眠时温度对体重和血糖含量以及肺的影响 实验目的：蟾蜍具有很高的经济价值，其中蟾酥是一种名贵的中药材。本实验通过改变温度，对冬眠时期的蟾蜍体重和血糖的测量，观察蟾蜍肺组织切片，从而研究处于冬眠时期的蟾蜍，温度对它体重，血糖以及肺组织的影响,进而使得蟾蜍养殖户能更好的利用本实验结果进行有效管理，合理安排资源，使蟾蜍安全越冬。 实验原理：蟾蜍冬眠期间是不进食的，通过消耗体内的脂肪来提供必要的生命活动能量。蟾蜍在进入冬眠后它的脂肪消耗会大大减少。进行测量观察找出蟾蜍在冬眠期间内某一温度范围的体重减少量是最少的。冬眠期间蟾蜍不进食，血糖含量应该是降低的，在不同温度条件下蟾蜍要维持必须的生命代谢所消耗能量是不同的，所以会存在血糖含量差异的扩大。冬眠期间蟾蜍是用皮肤进行呼吸，而非冬眠的蟾蜍是用皮肤辅助肺呼吸。 实验仪器：电冰箱，血糖仪，电子天平，剪刀，注射器，切片刀，切片机，恒温箱，温台，熔蜡炉，蜡杯，酒精灯，蜡铲，展片台，解剖刀，解剖针，解剖剪，解剖盘，培养皿，吸管，镊子，单面刀片，台木，毛笔，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅，聚氨脂泡沫无水酒精3份:冰醋酸1份或无水乙醇6份，氯仿3份，冰醋酸1份FAA固定液（50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，郝普特氏粘片剂，中性树胶。1%番红，1%固绿，1%过碘酸，Schiff试剂，0.5%偏重亚硫酸钠溶液，醋酸酐-吡啶混合液，0.5%~1%淀粉糖化酶溶液。 石蜡切片制作过程（苏木精-伊红对染法?） 1、固定液、染色液的配置 （1）Bouin氏液 苦味酸饱和水溶液 75ml 37%~40%福尔马林液 25ml 冰醋酸 5ml 苦味酸饱和溶液的浓度为100ml水中加1g苦味酸。 （2）Mayer苏木精液 苏木精 1g 蒸馏水 1000 ml 铵矾或钾矾 50 g 碘酸钠 0.2g 柠檬酸 1g 水合氯醛 50 g 将苏木精溶于蒸馏水内（需要时可微热），加入研细的明矾，摇震助溶（需要时再加温），明矾溶解后，依次加入碘酸钠、柠檬酸、水合氯醛等试剂。配制后即可供使用。 （3）曙红 曙红 0.5~1g 蒸馏水 100ml 混匀后过滤 2、取材:蟾蜍肺脏组织器官 （1）切取的组织块不宜太大，以便固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肺组织，切成一小块2~3mm厚。 （2）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。? （3）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能? 3、固定：将切好的肝组织用生理盐水冲洗后，立即投入卡诺固定液中固定，固定30~50min。? （1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。? （2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，可能失去固定作用。? （3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1~2次新液。? （4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。?4、洗涤 材料经固定后，除乙醇外，组织中的固定液必须冲洗干净，尤其是含有重金属的固定液。因为残留在组织中的固定液，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察。冲洗方法根据固定液的性质而定，固定液为水溶液的常用水洗涤，固定液含有乙醇的则用50%~70%乙醇冲洗。 5、脱水 用30%、50%、70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各40min，放入95%、100%各两面三刀次，每次20min。各种材料经固定与洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分除去。? （1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。? （2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸管吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。? （3）在低浓度或纯酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。