测定波长Modern Instrumental Analysis.PPT

19:11:38 导数分光光度法 　　 用吸光度对波长求一阶或高阶导数并对波长作图，可以得到导数光谱。 分光光度测定方法 分光光度测定方法 双波长分光光度法 双波长分光光度计是通过两个单色器分别将光源发出的光分成两束单色光，经斩光器并束后交替通过同一吸收池。因此检测的是试样溶液对两波长光吸收后的吸光度差。 As1和As2为背景吸收，一般只与样品的浑浊程度有关而与波长无关，因此两束光通过吸收池后的吸光度差与待测组分浓度成正比。 双波长分光光度法的特点 可用于悬浊液和悬浮液的测定，消除背景吸收。因悬浊液的参比溶液不易配制，使用双波长分光光度法时，可固定波长1为不受待测组分含量影响的等吸收点处，测定波长2处的吸光度变化，可以抵消混浊的干扰，提高测定精度。 无须分离，可用于吸收峰相互重叠的混合组分的同时测定。 双波长分光光度法的特点 可测定导数谱。 　　 固定波长1和波长2两波长差为1-2nm进行波长扫描，得到一阶导数光谱。有的仪器还带有测定二阶导数光谱的电路。 双波长分光光度法的特点 胶束增溶分光光度法 　　 胶束增溶分光光度法，是利用表面活性剂胶束的增溶、增敏、增稳、褪色、析相等作用，以提高显色反应的灵敏度、对比度或选择性，改善显色反应条件，并在水相中直接进行光度测量的光度分析方法。简言之，胶束增溶分光光度法是指，表面活性剂的存在提高了分光光度法测定灵敏度的一类方法。 分光光度测定方法 0.01 偏离比尔定律的原因 1）单色光不纯 半波宽 谱带宽?? 要求 ???1/10吸收峰半高宽 假设测定波长为?测，另一波长为?邻 ?测、?邻， 可以证明 当?测=?邻时，A=?测bC，A与C之间是直线关系 当?测?邻=时，产生正偏差 ?测?邻时，产生负偏差 ?测与?邻差值越大，偏差越显著 测定时尽可能采用最大吸收波长 影响 谱带宽1nm和15nmKMnO4的曲线 异丙苯的紫外吸收光谱 苯乙酮的紫外吸收光谱 1．溶剂效应： 对λmax影响： n-π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↓蓝移 π-π*跃迁：溶剂极性↑ ，λmax↑红移 对吸收光谱精细结构影响 溶剂极性↑，苯环精细结构消失 溶剂的选择——极性；纯度高；截止波长 λmax 三、影响紫外-可见吸收光谱的因素 溶剂效应 1：乙醚 2：水 1 2 250 300 苯酰丙酮 非极性 → 极性 n → ?*跃迁：兰移； ?? ；?? ? → ?*跃迁：红移； ??；?? 极性溶剂使精细结构消失； （a）苯酚的UV光谱图 （b）苯胺的UV光谱图 溶液酸碱性对紫外光谱的影响 pH值的影响 助色效应 共轭效应 立体结构和互变结构对吸收带的影响 顺反异构： 顺式：λmax=280nm； εmax=10500 反式：λmax=295.5 nm；εmax=29000 互变异构： 酮式：λmax=204 nm ? 烯醇式：λmax=243 nm 四、有机化合物的最大吸收波长计算 有机物最大吸收波长除可以用紫外分光光度计测定外，也可以利用Wood Ward规则进行计算，如共轭多烯烃的计算 练习 紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度计的基本结构 紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录（计算机）等部分组成。 双光束分光光度计的原理图 1. 光源 光源的作用是提供激发能,使待测分子产生吸收。 要求能够提供足够强的连续光谱、有良好的稳定性、较长的使用寿命,且辐射能量随波长无明显变化。 常用的光源有热辐射光源和气体放电光源。 利用固体灯丝材料高温放热产生的辐射作为光源的是热辐射光源。如钨灯、卤钨灯。 气体放电光源是指在低压直流电条件下,氢或氘气放电所产生的连续辐射。 1. 光源 氙灯 氘灯 钨灯 单色器的作用是使光源发出的光变成所需要的单色光。通常由入射狭缝、准直镜、色散元件、物镜和出射狭缝构成。入射狭缝用于限制杂散光进入单色器，准直镜将入射光束变为平行光束后进入色散元件。后者将复合光分解成单色光，然后通过物镜将出自色散元件的平行光聚焦于出口狭缝。出射狭缝用于限制通带宽度。 单色器 两种不同的单色器 吸收池　　用于盛放试液。石英池用于紫外-可见区的测量，玻璃池只用于可见区。 检测器 　　简易分光光度计上使用光电池或光电管作为检测器。目前最常见的检测器是光电倍增管，有的用二极管阵列作为检测器。　　 光电倍增管在紫外-可见区的灵敏度高，响应快。但强光照射会引起不可逆损害，因此高能量检测不宜，需避光。二极管阵列检测器的特点是响应速度快。但灵敏度不如光电倍增管，因后者具有很高的放大倍数。 紫外-可见分光光度计有单光束、双光束以及双波长等不同类型的