染色体畸变分析标本制备质量控制.docVIP

染色体畸变分析标本制备的质量控制 陈洋 周小敏 张琼 刘云富（惠州市职业病防治院 广东惠州 516008） 摘 要:目的：探讨如何在外周血淋巴细胞培养染色体畸变分析中做好质量控制，以获得良好的涂片效果。方法：在已消毒好备用的超净台内，用碘伏消毒采血管的头部，轻轻混匀后接种，加入秋水仙素工作液，经混匀、培养、收集细胞并离心后，弃上清液，加入低渗液混匀，给予预固定；重复固定后依细胞数量加入适量固定液，制片、染色、气干。于低倍镜下细致观察，计数200个分裂相。结果：细胞生长良好，分裂指数高，能够满足分析要求，染色体分散均匀，着色良好，长短适中，两条姐妹染色体大致平行分离，着丝粒清晰。结论:做好实验室内质量控制能提高染色体畸变的检出率和阅片速度，及时准确地反映辐射损伤情况，对放射工作人员健康进行监护，为意外放射性损伤事故进行生物剂量估算，放射患者诊断与治疗提供依据。 关键词: 放射人员体检；染色体；质量控制 当人体受到一定剂量的电离辐射后，可见染色体的变化，即染色体畸变。染色体畸变分析和微核试验是放射工作人员健康监护和评价慢性小剂量人员远期医学效应的重要指标,是最直接反映辐射损伤的检查项目之一[1,2]。细胞遗传学研究的对象是活的细胞，手工操作、中间环节多、培养时间较长,易受各种因素的影响而导致结果的偏离。所以对整个标本制备的过程要做好质量控制，才能确保做出需要的合格的染色体片。根据本实验室的细胞遗传学工作的经验，简单介绍适合于职业健康中染色体标本制备过程的质量控制体会。 1材料与方法 1.1材料 肝素抗凝外周全血2-3ml，购置RPMI1640培养基,秋水仙素工作浓度3μg/ml。 1.2方法 1.2.1接种：在已消毒好备用的超净台内，用碘伏消毒采血管的头部，将血样轻轻混匀，用5ml注射器取血0.3ml，接种到己融化好的培养基中，同时加入秋水仙素工作液，将培养基混匀。 1.2.2培养：将培养基放于37℃恒温培养箱中，培养50-54小时。 1.2.3收获 收集细胞：将培养基倒入10ml离心管中，1200rpm/min离心7min 低渗：弃上清液，加入低渗液8ml，用滴管轻打混匀。 预固定：加入固定液1ml，轻轻混匀。以1200rpm/min离心7min。 固定：弃上清液，加入固定液8ml混匀，静置20min，然后以1200rpm/min，离心7 min。 重复上一步。 弃上清后依细胞数量多少加入适量固定液，约0.2ml。 1.3 制片：取细胞悬液滴在备用的湿冷玻片上，在酒精灯上过火，写上编号。 1.4 染色：吉姆萨染液与磷酸缓冲液制成5%的工作液，把晾干的载玻片反盖在上面（细胞面朝下），将制备好的工作液灌满染色槽，排出气泡，染色20min后用自来水冲片，气干。 1.5 镜检：在低倍镜下(200×)寻找分散良好，长短适中的分裂相，换用油镜(1000×)对其进 行细致观察，每张片计数200个分裂相。 2 结果 细胞生长良好，分裂指数高，能够满足分析要求，染色体分散均匀，着色良好，长短适中，两条姐妹染色体大致平行分离，着丝粒清晰。 3 讨论 采血前的准备，培养基在每新换批号时应先与正在使用的做平行样，确认培养细胞成功后才可以批量使用。实验中所用的载玻片清洗干净后，要在铬酸浸泡24小时后，洗净于蒸馏水中浸泡，放置在冰箱中备用。 采血时，一定要注意消毒，避免污染，防止培养失败。在事故现场或下到工厂体检采血，不能马上培养的情况，在运输的过程中要注意低温保存，防止冻结，尽量避免震动，以减少溶血，并尽快进行培养。秋水仙素的浓度不宜过大，培养时间也不宜过长，否则易导致染色体过短，着丝粒分离。 收获细胞及制片的过程中，有几个关键的地方应引起注意。首先是低渗时间、比例、程度与培养的细胞数量有关，而低渗的好坏也会影响染色体分散的程度。低渗后的细胞易破裂，所以操作不要过猛。低渗液的温度对结果影响也很大，最好将其放置于37℃培养箱中预热。固定液一定要现用现配，固定彻底后再将细胞打散。染色是制片的最后一步，直接关系到制片的好坏，缓冲液PH值最好选择为6.8。另外，存放玻片的冰箱应避免存放酸碱，酸碱度对制片效果有直接影响。染色的时间也要依滴片的厚薄适当做调整。 总之，染色体畸变分析标本制备的每个环节都很重要，出现失误会导致最终制片的效果，增加观察的难度和检验结果的偏离。因此必须严格按照操作规程进行实验操作，并不断完善和总结经验，做好室内质控。另外操作规程只是室内质控的一部分，人员的培训，仪器设备的规范管理，培养基及其它试剂的质量控制都很重要。对实验室严格的质量控制，是保证职业健康检查质量的关键，同时也是认证一个机构水平的关键。[3] 【参考文献】 [1] 陈春林, 张仲达. 在体女性盆腔动脉血管网数字化三维模型构建方法及意义[J]. 中国实用妇科