HPLC法测定降糖益肾片中牛蒡子苷含量孔改.docVIP

HPLC法测定降糖益肾片中牛蒡苷的含量 刘德茂1 史德胜2 （1大连公安医院，辽宁 大连 116011 2天津丹溪国药研究所 天津 300061） 降糖益肾片是以牛蒡子为原料提取制得的中药制剂，具有补肝益肾，逐瘀通经之功效。临床常用于糖尿病及其急、慢性肾病并发症，能显著改善糖尿病肾病症状，具有良好的治疗作用。现代药理学研究结果表明，牛蒡子中活性成分为牛蒡苷元，在口服条件下，牛蒡苷在肠内菌的作用下很快转变为牛蒡苷元这一活性成份。由于药材中游离存在的牛蒡苷元含量较少，故以牛蒡子中的牛蒡苷为指标成分。本文采用HPLC法测定降糖益肾片中牛蒡苷的含量，该方法灵敏，准确，可很好的控制降糖益肾片的质量。 仪器与试剂 LC—10A型高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD—10A紫外检测器（日本岛津）；Anastar色谱工作站；乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。牛蒡苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：0819-200203）。降糖益肾片由本院制剂室提供（批号060312、060313、060314）。 2．方法与结果 2．1色谱分析条件：Irregular C18(4.6mm×250mm,10μm)；流动相：乙腈：水：10%磷酸（27：73：0.1）；流速：1.0ml·min-1；检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：20μl；理论塔板数：按牛蒡苷峰计算应不低于1500。 2．2对照品溶液的制备：精密称取牛蒡苷对照品25.10mg置25ml容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2．3供试品溶液的制备：取本品20片，研细，取30mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理10分钟，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2．4线性关系试验：精密量取对照品储备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取20μl进样，记录峰面积。以对照品的浓度为横坐标（X），以相应的峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程。Y-628.779，γ=0.9999。在0.0502～0.4016mg·ml-1范围内牛蒡苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。 2．5精密度试验：取对照品溶液（浓度为：0.2008mg/ml），依法进样6次，每次20μl，测定峰面积，结果峰面积RSD为0.69%。 2．6稳定性试验：取同一供试品（批号为：060313）溶液，按上述色谱条件，于0、2、4、6、8、24h进样，测得牛蒡苷峰面积的RSD为0.40%，表明本品在24h内测定结果稳定。 2．7重现性试验：取同一供试样品（批号为：060313）平行制备6份供试品溶液，依法检测，测定牛蒡苷平均含量为366.2mg/g,RSD为1.36%,表明重现性符合要求。 2．8回收率试验：采用加样回收法。取已知含量的样品（批号为：060313）约15mg，精密称定，共6份，加入牛蒡苷对照品溶液（1.006mg/ml）5ml，按样品测定项下方法测定牛蒡苷的含量，计算回收率。结果牛蒡苷平均回收率为100.26%，RSD为1.50%（n=6）。 2．9样品测定：将3批样品分别按供试品溶液制备法制成溶液，按上述色谱条件分别进样20μl，以外标法计算样品中牛蒡苷的含量，结果见表1，色谱图见图1。 表1 降糖益肾片中牛蒡子苷含量测定的结果（n=3） Table1 Analysis of content of Arctiin in Jiangtang Yishen Tablet (n=3) 批号 平均含量(mg/g) RSD(%) 060312 368.0 1.44 060313 366.2 1.36 060314 367.3 1.16 A B 图1 牛膀子苷对照品（A）和供试品（B）的色谱图 Fig.1 HPLC chromatograms of Arctiin reference substance (A) and Sample（B） 3.讨论 在牛蒡苷含量测定色谱条件选择时，主要对流动相进行了研究，分别采用药典（2005版）牛蒡子药材含量测定项下的流动相、乙腈-水（27：73）、甲醇