242 血液碳氧血红蛋白pdf.PDF

【名称】血液碳氧血红蛋白 【英文名】biood carboxy-hemoglobin 【别名】一氧化碳血红蛋白；CoHb 【概述】 一氧化碳 (carbon monoxide，CO)为无色气体，有微弱的臭味。分子式 CO，分子量 28.01。熔点－199℃。沸点－191℃。微溶于水，易溶于氨水。在 空气中燃烧时火焰呈蓝色。CO与氧的混合物燃烧时易发生爆炸。CO是一种常见 的严重危害人体健康的窒息性化学毒物。它是各种燃料不完全燃烧的产物。民 用小煤炉、工业废气和汽车废气都是重要的 CO污染源。CO污染对人体健康的 危害，主要表现在它与血液中的血红蛋白 (Hb)结合，形成碳氧血红蛋白 (carboxy-hemoglobin，COHb)后，使Hb失去输氧能力。严重CO中毒时，可因 组织缺氧而导致死亡。因此，血中COHb浓度的监测在健康监护方面具有重要意 义。 【原理】 (1)碳氧血红蛋白定性试验：一氧化碳与血红蛋白结合后，形成樱桃红色的 碳氧血红蛋白，它对碱抵抗力较正常血红蛋白为强。 (2)碳氧血红蛋白双波长定量测定：用连二亚硫酸钠(NaS
)将血中的 HbO2、MetHb还原成 Hb，使血中多组分的血红蛋白转化为只有 Hb和COHb两个 组分，前者的最大吸收波长为 320nm，后者为 432nm，在分光光度计上分别测出 被检血样在 420nm 和432nm两个波长处的吸光度，代人依比尔定律建立的联立 方程式，求出血样COHb含量。 【试剂】 (1)碳氧血红蛋白定性试验：50g/L NaOH。 (2)碳氧血红蛋白双波长定量测定： ①0.1mol/L PBS，pH6.85取13.6g KH
P 溶于约 800ml 去离子水中，溶解
后加去离子水至 1.0L(A液)。取17.4g KHP 溶于约 800ml 去离子水中，溶解 后加去离子水至 1.0L(B液)。然后将A 液和 B 液按 1∶1的比例配制成 pH6.85 缓冲液，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至6.85。此为试剂 Ⅰ。 ②溶血剂：取试剂 Ⅰ1份，加9份去离子水稀释。此为试剂Ⅱ。
③Na S (AR 级)：直接使用干粉，现用现称 。因其易吸湿分解失效，应避 免干燥保存。 【操作方法】 (1)碳氧血红蛋白定性试验： ①取试管 2 支，各加蒸馏水 3～5ml，一管加患者血液 3 滴，另一管加正常 人对照血 3 滴，混匀 。此时。如患者血中有一氧化碳，则血液呈樱桃红色。 ②每管各加 50g/L NaOH 1 滴，轻轻混合，正常对照管呈绿褐色，如患者血 液中有碳氧血红蛋白，则溶血液仍呈樱桃红色，为阳性；如与正常对照色泽一 致为阴性。 (2)碳氧血红蛋白双波长定量测定： ①F 值制定：制备 Hb溶液 (不含COHb)和饱和 COHb溶液 (COHb 含量为 100%)。取不吸烟并于近期无 C 接触史者的全血 50 μl，加入 6.0ml 试剂Ⅱ 中，放置 5min，使充分溶血。另取两只 25.0ml 容量瓶，每瓶准确加入上述溶 血液 2.0ml，在通风橱内，其 中一瓶通入空气 5min；另一瓶通入煤气
(CO)1min，然后通入氮气 2min。每瓶加入 Na S 250mg，加试剂 Ⅰ至刻度，加 塞颠倒 3～5 次，使其溶解。10min后，用420nm和432nm两波长比色，以试剂       Ⅱ调零，记录 A
、A
 、A
、A
 。根据 比尔定律：A＝a ·b ·c，因为 Hb 和COHb 均来自同一份样，血红蛋白含铁摩尔浓度(c)相同，比色条件相同 (b)， 故：