295 血清丙氨酸氨基转移同工酶pdf.PDF

【名称】血清丙氨酸氨基转移同工酶 【英文名】 【别名】 【概述】 丙氨酸氨基转移酶 (Alanine aminotransferase，ALT)，又称谷丙转氨酶 (GPT)，主要存在于各种组织细胞中，以肝细胞中含量最多。正常时，只有极少 量释放入血液中，故血清该酶活性很低。各种肝炎的急性期，药物中毒性肝细 胞性坏死等疾病时，肝细胞酶大量释放入血中，使血清ALT活性显著增高，因 此它是诊断病毒性肝炎，中毒性肝炎等肝病的重要指标。 【原理】 在ALT速率法测定中酶偶联反应式为： 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长 处，NADH呈现特征性吸收峰，而NAD则没有。因此，可在 340nm 监测吸光度的 下降速率(-△A/min)，计算出ALT的活性单位。 (1)单试剂法：血清与(试剂成分完整的)底物溶液混合，ALT 催化反应立即 开始，在波长 340nm，比色杯光径 1.0cm，37℃经90s延滞期后连续监测吸光度 下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A/min)，计算出ALT活力单 位。 (2)双试剂法：血清与(缺少 α-酮戊二酸的)底物溶液混合，37℃保温 5min，使样品中所含的 α-酮酸(如丙酮酸)引起的副反应进行完毕。然后，加 入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长 340nm 处连续监测吸光度下降速 率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A/min)，计算出ALT活力单位。 【试剂】 (1)单试剂法： ①试剂成分和在反应液中的参考浓度 pH 7.5 Tris缓冲液 100mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L α-酮戊二酸 15mmol/L NADH 0.18mmol/L 磷酸吡哆醛(P-5＇-P) 0.1mmol/L 乳酸脱氢酶 (LDH) 1200U/L ②市售 ALT底物的复溶及保存：按试剂盒说明书规定。但起始吸光度必须 大于 1.2A，试剂空白测定值必须小于 5U/L。达不到要求者，示为此试剂已不合 格，不能使用。 (2)双试剂法： 试剂成分：在反应液中的参考浓度 试剂 (Ⅰ)： Tris缓冲液 100mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L NADH 0.18mmol/L LDH 1200U/L pH 7.3 试剂 (Ⅱ)： α-酮戊二酸：15mmol/L 【操作方法】 (1)单试剂法： 具体操作程序根据各医院拥有的 自动或半自动生化分析仪型号及操作说明 书而定。下面 以半自动生化分析仪为例 。 ①血清稀释度：以100μl 血清，加1000μl ALT 底物溶液为例，血清稀释 倍数为 11，血清占反应液体积分数为 0.0909。 ②主要参数： 系数 1768 孵育时间 90s 连续监测时间 60s 比色杯光径 1.00cm 波长 340nm 吸样量 500 μl 温度 37℃ (2)双试剂法：以半自动生化分析仪为例 。 血清 100μl，加试剂(Ⅰ)1000μl，混 ，37℃温育 5min。然后，加入试 剂( Ⅱ)100 μl，混 。启动ALT催化反应。在波长 340nm，比色杯光径 1.0cm， 延滞期 30s，连续监测吸光度下降速率约 60s。根据线性反应期吸光度下降速率 (-△A/min)，计算出ALT活力单位。 【正常值】 酶测定温度 37℃，底物溶液中不含 P-5＇-P成分。成人 ALT为5～40U/L。 近年文献报告 的ALT参考值列于