分离胶浓缩胶样品缓冲液-生命科学学院生物学试验教学示范中心.PPT

实验基本知识 容 量 瓶 液体的量取 液体的倾倒 滴管的使用 试纸的使用 一定质量分数的溶液的配制 滤纸的折叠 7、实验六 酵母RNA的提取和鉴定 (4学时) 8、实验七 血糖含量的测定 （4学时） 9、实验八 脂肪酸的β-氧化 （5学时） 10、实验报告讲解及考核 （2学时） 绪　论 2 通过生物化学实验应该做到 学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。 训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。 学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验。 掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。 3 实验记录与实验报告 3.1 实验记录 实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。 实验中应及时准确地记录(专用纸，事先在记录纸上设计好各种记录格式和表格）所观察到的现象和测量的数据。 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差很大，也都应如实记录，不得涂改。 实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试剂的浓度等。 3 实验记录与实验报告 3.2 实验报告 实验报告的格式应为： ⑴ 实验目的； 　　⑵ 实验原理； 　　⑶ 仪器、材料和试剂； 　　⑷ 实验步骤； 　　⑸ 结果讨论（含数理据处）； 　　⑹ 注意事项; (7) 思考题 注意：实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有关的文献和教科书，充分运用己学过的知识和生物化学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析和见解，并欢迎对实验提出改进意见。 生物化学实验技术理论 层析技术 一、层析技术 1903年，俄国科学家M.C.Jber首创了一种从绿叶中分离多种不同颜色色素成分的方法，命名为色谱法(Chromatography)，由于翻译和习惯的原因．又常称为层析法。 80多年来，层析法不断发展，形式多种多样。50年代开始，相继出现了分配层析、离于交换层析、凝胶层析、亲和层析、吸附层析等。 几乎每一种层析法都已发展成为一门独立的生化高技术，在生化领域内得到了广泛的应用。 一、层析技术 1、层析技术原理 2、层析技术分类 3、常用层析技术原理 1、层析技术原理 层析原理：是一种物理的分离方法，利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质：糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。 2、层析技术分类 3、常用的层析原理 （1）分配层析——纸层析 原理：溶质在互不相溶的两相中溶解度不同，在终点时达到一种平衡，其比值为一个常数，即分配系数（α）。 固定相内溶质的浓度 流动相内溶质的浓度 固定相：滤纸上吸附的水 流动相：有机溶剂（正丁醇） 纸层析 纸层析是最简单的液一液相分配层析。 滤纸是纸层析的支持物。当支持物被水饱和时，大部分水分子被滤纸的纤维素牢牢吸附，因此，纸及其饱和水为层析的固定相，与固定相不相混溶的有机溶剂为层析的流动相。 对某些特定化合物，在特定的展层系统，一定的温度条件下，Rf是个常数。 （2）离子交换层析 原理：将能与周围介质进行离子交换的不稳定离子固定于惰性基质上，从而分离介质中的组分。 常用的惰性基质：人工合成树脂（单体：苯乙烯、交联剂：二乙烯苯） 阳离子交换剂：磺酸甲基、羧甲基、磷酸基 阴离子交换剂：二乙基胺乙基、三乙基胺乙基 可交换离子：阳离子：Na+、H+ 阴离子：Cl-、OH- 示意图（交换树脂表面） 示意图（离子交换过程） 电离基团（磺酸根） 示意图 （3）吸附层析 原理：当气体或液体中某组分的分子在运动中碰到一个固体表面时，分子会贴在固体表面上并停留一定时间然后才离开，此为吸附现象。 吸附现象形成的原因：吸附作用可能由几种作用力形成，包括被吸附物与吸附剂之间相反电荷基团与基团之间的静电引力(形成离子键)、氢键及范德华引力等。 在不同条件 下，占主要地位的作用力可能不同，也可能几种力同时起作用 吸附剂：氧化铝、活性炭、硅胶；纤维素、淀粉、聚酰胺；滑石、陶土、粘土。 吸附层析示意图 吸附剂 （4）亲和层析 原理：利用分子间具有专