受体研究试验基本分析方法.DOC

综合性实验 实验一 神经干复合动作电位与骨骼肌收缩的关系 【实验目的】 利用蟾蜍的坐骨神经干-腓肠肌标本，采用PowerLab多通道同时记录的优点，通过生物电放大器引导并记录神经干复合动作电位；使用机械-电换能器来获得骨骼肌的收缩曲线，两者对照，分析其产生的机制和特点。 【实验原理】 骨骼肌纤维受运动神经纤维的控制，神经纤维受到刺激后，其兴奋延神经纤维以动作电位的形式传导到相应的肌纤维，通过兴奋—收缩耦联，引起肌纤维收缩或舒张。神经纤维的兴奋表现为细胞膜上的生物电——动作电位的产生和传导，随后，肌细胞产生收缩，反映在张力和长度的变化上，两者产生的机制和表现形式均不相同。 【实验动物】 蟾蜍 【药品与器材】 蛙手术器械，PowerLab 8S主机，张力换能器，生物电放大器，桥式放大器，铁架台，肌槽，任氏液。 【实验步骤】 1．标本制备： 蟾蜍坐骨神经标本制备方法参见P19的蟾蜍神经肌肉标本的制备，标本浸在任氏液中约5 min，待其兴奋性稳定后实验。 2．仪器装置及程序设置 （1）连接仪器（图6-1）。 其中，S1 和S2为刺激电极，与PowerLab的output I相连，R1和R 2为记录电极，与生物电放大器相连，R 3为接地电极。 （2）参数设置：启动计算机，打开PowerLab主机电源，在桌面上单击Chart5图标，进入Chart应用程序窗口。 1）选择采样速度为40 K/s，显示比例为500:1。 2）在Channel 1显示神经干复合动作电位。生物电放大器参数设置参见P35的放大器参数设置。Range 为5～10mV，High Pass 为0.3～10Hz，Low Pass为1 KHz。选50Hz Notch来抑制交流干扰。 3）在Channel 2显示区域，显示骨骼肌收缩曲线。桥式放大器参数设置参见P35的放大器参数设置。Range为200 mV， Low Pass为100 Hz。如果在Bridge Amplifier设置对话框左侧的信号显示窗口中看不到输入信号，可用鼠标左键单击右侧的zero按钮，系统自动调整输入信号的零位。单击Bridge Amplifier设置对话框下方的units按钮，进入Units Conversion(单位转换）对话框。单位转换的方法参见P36信号幅度范围的设置和单位的转换。 4）在Channel 3显示区域，显示刺激方波。在刺激参数设置对话框下方的Stimulator Marker框中选取Channel 3。刺激设置方法参见P39的刺激输出的设置。设置完毕后，单击菜单栏的setup，选取stimulator panel，弹出Stimulator Panel（刺激面板），在实验中可以方便地由刺激面板来设置刺激频率、幅度和波宽等参数。 ①单次刺激：设置Mode为Pulse，单击Hz选项，Frequency 取1 Hz，Pulse Duration选0.1 ms。选中Set number of pulse选项，在Number中键入1，表示一次刺激输出1个刺激方波。Output Range为10 V ，Amplitude为0，然后可在实验中逐渐增大刺激强度。 ②双次刺激：设置Mode为Pulse，单击Hz选项，Frequency 取1 Hz，Pulse Duration选0.1 ms。选中Set number of pulse选项，在Number中键入2（双刺激）。Output Range为10 V，Amplitude选择最大刺激强度。在实验中通过Stimulator Panel(刺激面板)逐渐增大Frequency（刺激频率）。 ③多次刺激：Frequency 取1Hz，Pulse Duration选0.1ms。选中Set number of pulse选项，在Number中键入8，其余参数同上。实验中通过Stimulator Panel逐渐增大Frequency(刺激频率），使骨骼肌收缩表现为单收缩、不完全强直收缩和完全强直收缩。 实验中如要对标本进行刺激，应先用鼠标左键单击开始/停止切换按钮，程序开始采样记录，然后单击刺激面板的Stimulate按钮，即可产生刺激输出，同时Channel 3（3通道）显示刺激方波。 （3）连接装置：把坐骨神经-腓肠肌标本固定在肌槽上，用丝线把腓肠肌与换能器相连。 观察项目（1）神经干复合动作电位和骨骼肌单收缩与刺激强度的关系：单次刺激，逐渐增大Stimulator Panel中的刺激强度，记录神经干复合动作电位（分辨刺激伪迹和复合动作电位）和腓肠肌的收缩曲线随刺激强度的增大而变化，并记下波宽0.1 ms时的阈刺激和最大刺激强度数值。 （2）以最大刺激强度单次刺激标本。测量神经干复合动作电位以及腓肠肌单收缩的潜伏期、时程和幅值，测量方法参见P43的实验数据