尼龙绢袋集卵孵化法标准20160301.DOC

ICS?11.020 C 61 ????? WS、 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T XXXX—XXXX ????? 日本血吸虫毛蚴检测 尼龙绢袋集卵孵化法 Detection of schistosom japonicum miracidium Egg hatching method after nylon mesh bag concentration ? XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会???发布 前??言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。 本标准起草单位： 本标准主要起草人：日本血吸虫毛蚴检测 尼龙绢袋集卵孵化法? 范围 本标准规定了尼龙绢袋集卵孵化法检测人体粪便中日本血吸虫毛蚴的技术规范。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对日本血吸虫毛蚴的检测。 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。.1 日本血吸虫虫卵 schistosom japonicum egg 呈椭圆形，淡黄色，大小（74～106）μm×（55～80）μm，卵壳薄而均匀，无卵盖，侧面有一小棘，成熟虫卵内可见毛蚴。 .2 日本血吸虫毛蚴 schistosom japonicum miracidium 呈梨形或长椭圆形，左右对称，银灰色。大小（78～120）μm×（30～40）μm，前端有锥形突起，体表具有纤毛。 在卵内完成胚胎发育后破壳而出的现象。仪器设备 .1 光照培养箱 光照强度: 1 Lx～5000 Lx .2 显微镜 光学显微镜: 40 ×～400 × 试剂材料 .1 孵化用水 采用无水虫、无余氯、pH .8～7的清洁水体参见附录A。 .2 尼龙绢袋 57 μm/25.4 mm（260目）尼龙绢 4.3 筛 孔径为250 μm/25.4 mm（60目）。 .4 烧瓶 250 mL或500 mL三角。 .5 其它 放大镜、压舌板或筷子、夹子、毛细吸管、载玻片、2%碘酒等。 检测步骤 .1样品 采集受检者新鲜粪便，重量不少于30 g，存放于广口带盖且防渗漏洁净的密闭容器中，将受检者基本信息（姓名、编号、送检日期）标记于容器外部。采集后的样本应在24 h内送检，如未能及时检测，应在4 ℃条件下冷藏保存，时间不超过72 h。 .2样品检测.2.1 验收登记 验看粪便重量、质量及标签，核对无误后统一编号，登记。 .2.2 淋水冲洗 5.2.2.1 将筛叠放于尼龙绢袋上，尼龙绢袋下口用夹子夹住。 .2.2.2 取受检者粪便30 g置于不锈钢筛中，用水冲淋，压舌板或筷子调浆，使粪液滤入尼龙绢袋中。.2.2.3 移去筛，继续用水冲洗袋内粪渣，用压舌板或筷子轻轻振荡尼龙绢袋使过滤加速，直至滤出液变清为止。 .2.2.4 取下尼龙绢袋下口的夹子，将袋内的滤渣用孵化用水淋洗入烧瓶，继续加孵化用水满至离瓶口1 cm处。 .2.3 毛蚴孵化 将盛有滤渣的烧瓶置于光照培养箱（20 ℃～30 ℃）或相同室温下孵化，在3600 Lx～3800 Lx光照强度下，孵化4 h～12 h，一般需观察2～3次，参见附录。 每批实验设置血吸虫阳性粪便作为对照。 .2.4 毛蚴观察 取出烧瓶，瓶口向着光源，背衬以黑，平视观察水面下4 cm范围内浮游生物，每瓶每次观察时间不少于3 min。必要时可用放大镜观察。如见可疑毛蚴，用毛细吸管吸出，均匀分滴于载玻片上，或加1滴碘酒固定，在显微镜下（50 ×～100 ×）观察其游动状态或形态。毛蚴应与水中原生动物相鉴别，参见附录。 为提高检出率，如孵化阴性，可进行沉渣镜检虫卵。 .2.5 用具清洗及灭卵 用具每次使用后要洗刷干净，用60 ℃～80 ℃热水浸泡2 min~3 min灭卵。 .3结果判定 查见日本血吸虫毛蚴即判定为阳性。 孵化用水处理 尼龙绢袋集卵孵化法采用无水虫、无余氯、pH .8～7.的弱碱性清洁水体用于孵化。A.1孵化用水处理 A.1自来水处理 将自来水放在敞开的容器内静置24 h让其自然脱氯，或在自来水中加入硫代硫酸钠（0.2 g/50 L～0.4 g/50 L），静置后使用。 A.2井水处理 若水质较浑浊，可静置至澄清或加入明矾澄清水质（1.5 g/50 L～2.0 g/50 L）。若含有水虫，可加入65%有效氯的漂精片（0.17 g/50 L）或30%有效氯的漂白粉（0.35 g/50 L）进行杀虫，然后静置自然脱氯或硫代硫酸钠脱氯。 A.余氯测定 取处理后的水100 mL于纳氏比色管中，加邻甲苯联胺5 mL混合2 min～3