李虹试验指导.DOC

课程名称：细胞及遗传学实验：细胞生物学实验部分 课程性质：基础必修 课程代码本大纲主笔：吴俊 邹方东 面向专业：生物科学、生物基地、生态、生物技术等 实验讲义：细胞及遗传学实验 一、课程学时学分 二、实验地位、作用和目的 实验地位为生物科学领域所有本科生必修；作用和目的是训练学生实验动手能力、分析问题能力、解决问题能力，以及设计实验等能力。 三、基本原理及课程简介 见各个具体实验 四、实验方式及基本要求 学生在老师指导下亲手操作， 基本要求是严谨、求实、创新 五、实验报告 提交实验报告和总结 六、考核与考试 考核 七、基本设备与要求 八、实验项目及实验内容提要 实验1 细胞形态结构观察及大小测定 实验类别：训练 实验内容：测微尺的使用，细胞形态结构观察及大小测定 实验2 叶绿体的制备及其对染料还原作用 实验类别：训练及验证 一、实验原理 细胞或组织和分离介质混合，经破碎匀浆后用差速离心法，经几次不同转速可以获得不同的细胞器。被分离的离体叶绿体是否具有光合活性，可以根据对染料（2.6-二氯酚靛酚）在光下是否具有还原作用鉴定。 二、实验内容：叶绿体的制备及其对染料还原作用 实验3 细胞骨架的显示与观察 实验类别：训练与验证 方法Ⅰ 组织化学法 一、实验原理 骨架纤维成束分布、结构经染色后，有夸大作用。由细胞经TritonX-100抽提后剩下的主要是细胞骨架成分，使得显现更清晰。能直接在光学显微镜下观察。 二、实验内容：洋葱表皮细胞骨架的组织化学法 方法Ⅱ 间接免疫荧光染色显示HeLa细胞内角蛋白中丝 一、实验原理 用对应于细胞内的抗原（角蛋白）的特异抗体与体外培养的HeLa细胞一起温育，该抗体就与细胞内的角蛋白中丝特异结合，然后用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗球蛋白抗体与之作用而结合。在荧光显微镜下观察细胞骨架。 二、实验内容：间接免疫荧光染色显示HeLa细胞内角蛋白中丝 实验4 碱性磷酸酶的显示 实验类别：验证与验证 一、 实验原理 在一定条件下，使细胞中的碱性磷酸酶作用于其底物，将其产物在原位进行捕捉、沉淀转化成有色产物。这些操作都是在原位进行的，可以认为黑色沉淀的位置就是酶所在的位置 二、实验内容：碱性磷酸酶的显示 实验5 小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 实验类别：训练 一、实验原理 当机体受到某些损伤因素时，能招引巨噬细胞，同时巨噬细胞有趋化性，在接触到病原体或异物时，细胞膜凹陷伸出伪足包围异物，并发生胞吞作用形成吞噬泡。含台盼蓝的淀粉肉汤，可使腹腔中有较多的吞噬细胞，以供观察吞噬活动。 二、实验内容：小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 实验6 人淋巴细胞染色体制备及核型分析 实验类别：训练及验证、分析 一、实验原理 将外周血接种在适当的培养基中进行培养。经药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。向培养物中加入适量的秋水仙素，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液处理，制片，可获得较好的染色体标本。 二、实验内容：人淋巴细胞染色体制备及核型分析 实验7 动物染色体分带技术 实验类别：验证与分析 一、实验原理 G-带的形成与Giemsa染料的组成的染色特性是分不开的。G-带的形成与染色体的功能有关染色体上某一区域的DNA为重复序列，转录活性低，相应地包装它们的蛋白质的也较稳定，成为染料沉淀物沉积的环境，从而显示出阳性带，相显示阴性带。 二、实验内容：动物染色体分带技术 实验8 人淋巴细胞姊妹染色单体区分染色 实验类别：验证与分析 一、实验原理： 姊妹染色单体化学组成及结构都是一致的，因此不能用单纯染色方法将之区别开来。 细胞在含Brdu的培养基中培养了2个细胞周期，再以Hoechst33258染色后，两条姊妹染色单体就出了色差。这就是姊妹染色单体的区分染色（SCD）。 二、实验内容：人淋巴细胞姊妹染色单体区分染色 实验9 联会复合体的染色与观察 实验类别：训练及验证 一、实验原理 使用光镜可以检查联会复合体，依靠光镜显示联会复合体，不仅对SC 的构造、功能的研究有用，而且在临床细胞遗传学中对研究染色体异常现象也是有用的，联会复合体是指在减数分裂前期，同源染色体的配对行为所形成的一种特殊结构，由侧线、横线和中央轴三部分组成，在前期的粗线期时结构较典型，它是动植物同源染色体联会时相当普遍的一种结构。 二、实验内容：联会复合体的染色与观察 实验10 细胞培养及冻存与复苏 实验类别：训练分析 一、实验原理 从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充