生物发光是由荧光素酶与荧光素.PPT

生物发光的原理及其应用bioluminescence 05级生物技术3班 开祥云 每当夜幕降临时，无数发光的浮游动物聚集，使海面出现红色闪光，犹如万家灯火，形成海上奇观。 生物发光是一种普遍的自然现象，在海洋生物中尤为常见。 生物体发出的光辐射。它不依赖于有机体对光的吸收，而是一种特殊类型的生物化学发光。  目前，根据发光的机理不同国际上将生物发光分为四种： 受激荧光 发光生物发光 化学发光 生物的超微弱发光 四种发光： 1. 受激荧光 受激荧光是指生物体在受到外界光辐射的作用时，体内固有的荧光物质或吸收的荧光标记物发光的现象。 2. 发光生物发光 以萤火虫的闪光为代表。 3. 化学发光化学发光是在化学反应过程中(主要为氧化还原反应)发出可见光的现象。化学发光反应是由两个关键步骤组成：激发和发射。许多化学反应进行时能释放足够的自由能而把参加反应的物质之一激发到能发射光的电子激发态，生成一种激发态产物，在它回到基态时，剩余能量转变成光子能量产生发光现象。 4. 生物超微弱发光随着生物发光研究的进一步深入，发现人体的器官、组织、细胞、乃至大分子都在发光，不过发光强度更弱。目前研究已涉及到细胞、亚细胞乃至生物大分子的层次。越来越多的实验表明，DNA 是生物超微弱发光的一个辐射源。 生物发光可分为: 被动发光：如植物，那些微弱的红光是没能参与光合作用多余的光，一般的看法是这种光无意义。 主动发光：如萤火虫的闪光。 另外，有些动物本身并不会发光，但在共生的环境中它们会利用发光细菌的光为自己服务。 动物的发光器有两类，一类具有发光细胞，另一类具有共生的发光细菌。 发光细胞是起源于皮肤而发生了变异和特化的腺细胞，能分泌荧光素和荧光素酶。 如果发光细胞内同时含有荧光素和荧光素酶，则发光可在细胞内进行，此称细胞内发光；如果发光细胞内仅含有荧光素或荧光素酶，则发光必须在分别含有荧光素和荧光素酶的不同发光细胞之分泌物相遇时才能产生，此称细胞外发光。 生物发光的一般机制是：  荧光素酶（Luciferase）以荧光素（Luciferin）、三磷酸腺苷（ATP）和O2为底物，在Mg2＋存在时，底物在催化循环中会形成还原型核黄素磷酸盐和醛化合物，当遇到荧光素酶和氧时，形成一种激发的络合物。络合物断裂时生成氧化核黄素磷酸盐、酸、水及一个光子，化学能转变为光能。 荧光素+ ATP+ O2→核黄素磷酸盐+醛化合物核黄素磷酸盐+醛化合物→激发的络合物激发的络合物→氧化核黄素磷酸盐+酸+水+光子化学能→光能 ATP既是荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中，ATP在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系。 研究发现生物发光有以下几个特点： 1 生物发光的颜色范围很宽，可从红光到深蓝光； 2 氧是几乎所有生物发光系统中必须的因素； 3 生物发光是由“荧光素酶”与“荧光素”的化学反应所引起的； 4 所有的生物发光反应几乎都是酶-底物类型的反应，但复杂程度不同，某些生物发光反应涉及3种或4种底物，而另一些生物发光反应甚至需要3个或4个酶的体系。 5 高效率。在发光的同时，没有辐射热能的消耗，因而生物发光的效率是很高的。几乎能将化学能百分之百地转变为可见光，为普通电光源效率的几倍到几十倍。 6 安全性。因为冷光本身无热，所以没有爆发火花的危险，在油库、炸药库、矿井等易燃易爆场所，用其作照明光源最为理想，因此被称为“安全之光”。 生物发光的应用 1 ATP生物荧光检测 ATP生物荧光检测是基于荧火虫发光机理所设计，荧火虫发光细胞内具有特殊的发光物质-荧光素及荧光素酶，荧光素易被氧化，它在荧光素酶催化下，由ATP激活，使之与氧结合，荧光素分子中的电子跃迁到高能级，处于不稳定的激发态，当电子跳回到低能级时，即发出荧光光子。由于ATP能不断提供能量，因而荧光素分子不断地被激活，即可连续地发出荧光，其荧光强度与ATP浓度在一定范围内成线性关系，通过用发光光度计，可以检测出待测液中ATP含量。该法灵敏度极高，可检测出10μl样品中的ATP含量。研究表明，各生长期的细菌均有较恒定水平的ATP含量，因此，提取细菌的ATP，利用生物发光法测出ATP含量后，即可推算出样品中的含菌量，整个过程仅为十几分钟。由于生物发光法无需培养微生物过程，操作简便、灵敏度高，在短时间内即可得到检测结果，具有其他微生物检测方法无可比拟的优势，是目前检测微生物最快的方法之