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荧光定量PCR原理、系统和应用.pdf

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荧光定量PCR原理、系统及应用 刘帅 技术支持 吉泰生物科技有限公司 liushuai@ 公司电话:010 主要内容 ★荧光定量PCR原理 ★荧光定量PCR 系统 ★荧光定量PCR应用 主要内容 ★荧光定量PCR原理 ★荧光定量PCR 系统 ★荧光定量PCR应用 定量PCR定义 一种实时监控PCR扩增的技术! 基本要素: 1. PCR体系中加入荧光基团 荧光信号 2. 荧光信号 起始模板定量 PCR过程荧光信号采集 定量PCR化学原理 定量PCR化学原理 法 料 染 DNA双链结合化学染料 SYBR Green Ⅰ EvaGreen …… 标记荧光基团的寡聚核苷酸链 法 针 探 Taqman Probe Molecular Beacon Probe Hybridization Probe …… SYBR Green Ⅰ染料 SYBR Green Ⅰ与双链DNA小沟特异结合。 PCR过程中变性时,DNA双链分开,SYBR Green Ⅰ游离, 荧光信号非常低;复性和延伸时,SYBR Green Ⅰ与DNA双链结 合,荧光信号增强1000倍。 SYBR Green Ⅰ与所有双链DNA小沟结合,无法区分非特 异扩增产物、引物二聚体等干扰双链DNA,需要进行熔解曲线分 析步骤区分不同GC含量PCR产物TM值,对PCR产物特异性进行 检测。 SYBR Green Ⅰ-熔解曲线分析 单一特异峰值, RealTime PCR扩 增特异目标检测位 置,定量准确。 出现杂峰, RealTime PCR扩 增出现非特异扩增 产物,定量不准确。 Taqman探针

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