维生素的分类及生理功能.PPT

4.7 维生素的测定 概述 脂溶性维生素A、E的测定 水溶性维生素 B、C的测定 4.7.1 概述 （1）维生素的分类及生理功能 （2）测定的目的和意义 （3）维生素的测定方法 （1）维生素的分类及生理功能 功能： 维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类小分子有机化合物，结构复杂，种类多。目前已经确认的有30多种，其中有20种被认为与维持人体健康和促进生长发育是至关重要的。 主要是通过作为辅酶的成分调节代谢过程，人体对它的需要量极少，但作用非常大。 一般在体内不能合成或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相关新陈代谢的紊乱，出现各种特有的症状。 分类： 按溶解性能可将它们分成两大类： 一类是能溶在脂肪或脂溶性溶剂中的，叫脂溶性维生素（如A、D、E、K等）； 另一类是能溶解在水中的，叫水溶性维生素（如B1、B2、B6、C、 B12等）。 （2）测定的目的和意义 （3）维生素的测定方法 微生物法：基于某种微生物生长需要特定的维生素，方法特异性强、灵敏度高、不需要特殊仪器，样品不需经特殊处理，但只能测定水溶性维生素。 化学法：比色法、滴定法 仪器法：色谱法、荧光法、酶法、免疫法等。特别是HPLC可用于大多数维生素的测定，并且在某些条件下可同时分析几种维生素，但分析费用较高。 应根据不同的食品基质和条件选择不同的分析方法 重点讲解的方法： 高效液相色谱法（HPLC法）同时测定脂溶性维生素A和维生素E 比色法测定维生素A HPLC法测定胡萝卜素 滴定法和比色法测定维生素C 荧光法测定 B1、B2 4.7.2 维生素A、E的测定—HPLC法 （GB/T 5009.82) 以乳粉为样品演示样品的预处理和HPLC的使用 VA的性质： 维生素A是β-紫罗酮环与一元醇所组成的一类化合物及其衍生物的总称。通常所说的维生素A是指视黄醇或视黄醇醋酸酯。 ⑴ 因有许多不饱和链，故见光易分解； ⑵ 在缺氧情况下，对热较稳定，对光特别敏感。测定速度要快。 ⑶ 不溶于水，溶于有机溶剂，对碱稳定 VE的性质：又称生育酚，目前已经确认 的有8种异构体，最常见的有α、β、γ、δ-生育酚。溶于脂溶性溶剂，对热稳定，酸性环境中比碱性环境中稳定，无氧条件下，对热、光及碱性环境中也相对稳定。VE广泛分布在各种粮食的胚和植物油中。 测定原理： （1）液相色谱的原理：液相色谱是采用液体为流动相的一种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录和数据处理装置等部分组成。高压泵以恒定的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理 色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作图。 （2）高效液相色谱检测样品中的维生素A、E的原理： 样品中的维生素E及维生素A经皂化提取处理后，将其从不皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生E和维生素A分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量 (3）什么是内标法？ 取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制成标准溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图取标准被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高的比例为纵坐标，取标准被测成分量和内标物质量之比或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。 然后按单体中所规定的方法调制试样液，调制试样液时，预先加入与调制标准溶液等量的内标物质，然后按制作标准曲线时的同样条件下得出色谱图，求出被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高之比，再按标准曲线来求出被测成分的含量。 内标物的选取原则：能与被测成分完全分离，但其保留时间又尽可能接近被测成分的稳定的物质。 试剂 （1）无水乙醚：不含有过氧化物。 （2）无水乙醇：不得含有醛类物质。 （3）无水硫酸钠。 （4）甲醇：重蒸后使用。 （5）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。 （6）抗坏血酸溶液（100g／L）：临用前进行配制。 （7）氢氧化钾溶液（50g／100g）：取50g氢氧化钾,溶于50g水中，混匀 标准溶液的配制 （1）维生素 A标准液：视黄醇（纯度85％） 或视黄醇乙酸酯（纯度90％）经皂化处理后使用。 用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为lmg/mL。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。 （2）维生素E标准液：a-生育