萘降解菌LHJ38生物合成靛蓝的研究 - 分子催化.PDF

　第２１卷 第５期 分　　子　　催　　化 Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．５　 　２００７年１０月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＡＴＡＬＹＳＩＳ（ＣＨＩＮＡ） Ｏｃｔ．　２００７　 文章编号：１００１３５５５（２００７）０５０４５３０５ 萘降解菌ＬＨＪ３８生物合成靛蓝的研究 １，２ １ １ １ 邱　森 ，章　俭 ，宋　昊 ，夏春谷 （１．中国科学院兰州化学物理研究所　羰基合成与选择氧化国家重点实验室，甘肃 兰州 ７３００００； ２．中国科学院研究生院，北京 １０００３９） 摘　要：萘降解菌ＬＨＪ３８在金属盐培养基中加入水杨酸钠诱导培养后能提高其生物合成靛蓝的能力，在ＬＢ培养 基中加入水杨酸钠反而抑制了其生物合成靛蓝的能力．与ＬＨＪ３８最适生长ｐＨ值不同，ＬＨＪ３８生物合成靛蓝的最 佳ｐＨ值范围是８．４５—９．４５，在ｐＨ为８．９５的情况下生物合成靛蓝能力是其在ｐＨ值为６．９５的情况下的两倍． 关　键　词：靛蓝；生物合成；水杨酸钠；诱导；吲哚 中图分类号：Ｏ６４３．３２ 文献标识码：Ａ 　　靛蓝是最早发现的天然染料之一，广泛用于印 ［１３］ 染、医药和食品工业 ．传统靛蓝的生产方法是从 含有靛蓝的植物中提取．自从 Ｂａｙｅｒ发现靛蓝的分 子结构以后，植物靛蓝逐渐被合成靛蓝替代，然而 合成靛蓝反应中使用的邻苯二甲酸酐能导致人体急 性和慢性中毒，对呼吸道和中枢神经以及肝脏均有 一定的损害；苯胺是一种潜在的致癌物质．因此， 图１以吲哚为底物生物合成靛蓝 利用生物转化合成靛蓝的研究引起了科学工作者的 Ｆｉｇ．１Ｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｉｎｄｉｇｏｆｒｏｍｉｎｄｏｌｅ ［１］ ［１４］ 注意．上世纪八十年代，Ｅｎｓｌｅｙ等人 发现克隆有 ｌｅｒｏｎｉｉＬＨＪ３８ 静止细胞生物合成了靛蓝，并考察 萘降解基因的Ｅ．ｃｏｌｉ菌能生物合成靛蓝，随后，一 了水杨酸钠以及 ｐＨ值对 ＬＨＪ３８生物合成靛蓝的 ［３１１］ 些能够生物合成靛蓝的其他菌株陆续被报道 ． 影响． 与化学合成法相比，生物转化法生产靛蓝在降低生 １材料和方法 产成本、减少能耗、生产安全及环境安全等方面无疑 都具有重要意义． １．１菌种 在生物转化合成靛蓝的过程中，以单加氧酶或 帕氏氢噬胞菌 （ＨｙｄｒｏｇｅｎｏｐｈａｇａＰａｌｌｅｒｏｎｉｉ） 双加氧酶为核心［１，１２］．在双加氧酶催化合成靛蓝的 ＬＨＪ３８，由中科院兰州化学物理研究所 ｏｓｓｏ国家重 过程中，首先将吲哚氧化成二羟二醇，二羟二醇脱 点实验室筛选，经中国典型培养物保藏中心鉴定并 氢生成羟化吲哚，后者在空气中二聚生成靛蓝． 保藏，保藏编号Ｎｏ．Ｍ２０３０５３． 　　现有关生物合成靛蓝的报道大都集中在以靛蓝 １．２培养基 为染色指示剂来指导相关酶的基因重组表达，而对 金属盐培养基：ＮａＨＰＯ９．０ｇ，ＫＨＰＯ １．５ ２ ４ ２ ４ 生物合成靛蓝反应体系及动力学研究较少［３，１１，１３］． ｇ，ＮＨＣ１２．０ｇ，ＣｏＣ１·６ＨＯ１５．３ｍｇ，ＭｇＳＯ · ４