728 春季2001 考试三姓名.PDF

7.28 春季2001 考试三 姓名 问题一 /25 分 问题二 /25 分 问题三 /30 分 问题四 /20 分 总共 / 100 分 问题1 25 分 你在一个药业公司工作 正在努力鉴定新的抗结核杆菌的抗生素 你近来在 从亚马逊雨林中分离到的土壤细菌中鉴定出一种新的抗生素 它对结核杆菌有很 好的抗性 与药业公司领导想法相同 你希望有朝一日 你能将这个抗生素命名 为CoughNot 在开始临床试验之前 你需要鉴定这个抗生素作用的对象 1A 6 分 描述你将进行的试验 来鉴定是否这个抗生素抑制DNA 复制 转录 或转译 整合分析 把细胞或细胞提取物与放射性标记的dNTP 温育 分离DNA 检测 放射性 DNA 复制 同样的 但是放射性标记的dUTP 转录 同样的 但是防射性标记的是氨基酸 如果细胞提取物 来自于结核杆菌 而非兔网织红细胞 则测定的是针对结核杆菌的转译抑制 而非兔网织红细 胞转译 对于三种试验 对抗生素进行 测评 如果使用的纯化的产物 而非细 胞提取物 则分数减半 因为体内有许多蛋白质可以被药物抑制 比如 对 DNA 复制而言 启动蛋白 引发酶 解旋酶 等等 转译 1B 3 分 在完成试验设计之后 你排你的技术人员进行每一项分析操作 他们首先进行了转译方面的分析 发现能够被CoughNot 抑制 他们想进行更详 细的分析 以找出抑制的目标 但是你坚持他们继续进行复制与转录方面的分析 请简要解释为什么必须这么做 许多过程能够被这种药物所抑制 转录对转译是必需的 复制会抑制细胞 虽然代谢过程会继续 但转录与转译的水平会被改变 如果未如此讨论 但认识到复制在转译之前 或者没有复制会杀死细胞的话 分数可以给 在完成了其他的分析后 你的技术人员终于让你确信 CoughNot 的作用对象是 转译过程 接下来 你想鉴定到底是转译过程的哪一步被这个抗生素抑制 最后 35 你把CoughNot 加到体外转移分析系统中 其中含有 S- 甲硫氨酸 你获得了如 下结果 . . 1C 6 分 基于这个图 关于 CoughNot 抑制的转译步骤问题 你能得出什 么结论 你假定抑制是在几秒钟之内发生的 解释一下这个图如何支持你的结 论 抑制或终止 在加入CoughNot 之后 转译继续了一会儿 延伸不会受到影响 象一个慢终止DNA 复制突变体 然而 过了一会后 转译被抑制了 当加 入药物后 核糖体或者终止了蛋白质的合成 或者新的转译过程被抑制 为了进一步区别鉴定可能被CoughNot 抑制的转译步骤 你进行了一个不同 35 的转译反应试验 你放射性标记 S- 甲硫氨酸 在你开始进行一个基于编码50kd 蛋白质的mRNA 的体外转译之前加入CoughNot 在几个不同的时间间隔之后 你把核糖体和相关蛋白质分离出来 在 SDS凝胶上对蛋白质进行分离鉴定 并将最终的凝胶对X-胶片进行曝光 你获得如下试验结果 1D 4 分 这些数据如何改变了你的有关于转译步骤被抑制的假定 基于这 些数据 为CoughNot 的作用机制建议一种模型 问题不在于转译起始 因为药物是在加入MRNA 开始转译之前加入的 但是 不久 在一定数量的全长蛋白质合成之后 没有新的转译起始 40-60 秒 因 此 问题出在终止步骤 在全长蛋白质合成之后 核糖体未被释放 因此不能 开始新的蛋白质合成 1E 6 分 你想鉴定一下在加入C