凝结芽孢杆菌Bacilluscoagulans之研究.DOC

凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)之研究 指導老師: 李國陽 二技生技四甲專題學生樹惠春滿 摘要: 乳酸菌可以降低腸胃道中之PH值,而達到抑制腸內腐敗菌及致病菌之生長,同時它亦可能產生多種抗菌物質可以殺死腸道中之壞菌.正由於乳酸菌具有這些優秀之功能,因此篩選出優良的乳酸菌種是我們研究重點. 根據顯示研究孢子本身具有耐酸性,耐高溫性,及高度貯存安定性,而凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)為其少數可產生孢子之乳酸菌種之一. 本研究探討凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)的最佳生長環境及最佳產孢的溫度,並測其孢子的耐受性,實驗中改變不同的液態培養基之配方(氮源,碳源…)與培養條件(PH值及溫度),發現PH6.8溫度36.5℃是較適菌種的生存環境,而利用不同的溫度尋求最適孢溫度,結果顯示45℃為最佳產孢溫度. 壹.前言: 發酵食品中所使用之微生物包括黴菌(mold),酵母菌(yeast)及乳酸菌(lactic acid bacteria)等,其中以乳酸菌為最被廣為應用之一群,而乳酸菌通常是泛指能夠發酵碳水化合物,以產生乳酸為主要產物之微生物,乳酸菌在多數動物消化道中為優勢菌,細胞較大,通常以成隻或成串出現;少數具有芽胞及莢膜,能在很廣圍的溫度(15℃~45℃)中生長,而最適宜的溫度為37℃;其最適宜PH值則為5.8在左右. 乳酸菌用於發酵食品一方面除了能夠賦予食品增加風味,增加食品的營養價值外,另一方面其具有抑制腸道中有害微生物的生長,調節及建立腸道內菌相外,其還具有治療腸內不適所引起之腹瀉,降低血中膽固醇,並且改善乳糖不耐症以及抑制致癌因子及癌細胞等等療效,就因乳酸菌具有這些優點的存在,因而乳酸菌至今才會被世界各地延用多年. 雖然在市面上利用乳酸菌所製造出的產品十分眾多,例如優酪乳(統一AB優酪乳,光泉晶球優酪乳…等),優格,起司,乳酪,三共胃腸藥,表非明,泡菜….等等相關的產品.但在這些產品之中能夠真正在人體中發生其作用的乳酸菌之菌種十分的少,其主要原因乃是人體的胃酸值介於PH值2~3之間,而使得許多乳酸菌種根本無法在此低PH值之下生存,所以市面上有的產品的確有很強之健胃整腸的效果,但有的產品其功能卻令人十分的值得懷疑. 根據許多文獻中記載中孢子本身具有高度的耐酸性,耐高溫性,及高度貯存安定性,但乳酸菌中會產生孢子的菌種卻十分的少見,而其中凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)就是其中一種會產生孢子之乳酸菌菌種. 單位 藥品 Glucose的改變 Peptone的改變 g/L g/L Glucose 10 15 5 10 10 10 Peptone 5 5 5 5 7.5 2.5 酵母萃取物 3 3 3 3 3 3 Maltose extract 3 3 3 3 3 3 PH 6.8 6.8 6.8 6.8 6.8 6.8 貳.材料與方法: 一.藥品: 1.crystal violet 2.iodine solution 3.乙醇 4.safranin 5.液態培養基: 單位 藥品 酵母萃取物的改變 Maltose extrac的改變 g/L g/L Glucose 10 10 10 10 10 10 Peptone 5 5 5 5 5 5 酵母萃取物 3 4.5 1.5 3 3 3 Maltose extract 3 3 3 3 4.5 1.5 PH 6.8 6.8 6.8 6.8 6.8 6.8 6.固態培養基(BCP) Glucose 1g/L 酵母萃取物 3g/L Bromocresol purple 0.04g/L L-Cystein 0.2g/L Peptone 5g/L Agar 15g/L Tween80 1㏄/L PH7 7. 0.1M磷酸鹽緩衝溶液(Phosphate Buffered Saline;PBS)組成份為disodium hydrogen phosphate 1.2g/L;monosodium dihydrogen phosphate 0.22g/L;sodium chloride 8.5g/L,PH值