cyclinD1-P16-P27联合判断癌症患者病情探究.docVIP

cyclinD1\P16\P27联合判断癌症患者病情探究【摘要】 目的: 通过分析不同病期血液中淋巴细胞cyclinD1、P16、P27的表达情况，探索这些指标在癌症发生发展变化中的临床意义。方法: 回顾性分析86例经病理诊断的癌症患者的血液学cyclinD1、P16、P27的表达情况，比较稳定和进展组间cyclinD1、P16、P27表达的差异性（其中52例稳定、34例进展），计量资料以(X±S)表示，采用两独立样本t检验，计数资料采用卡方检验，p 0.05），外周血淋巴细胞cyclinD1、P16的表达进展组均显著高于稳定组（p 0.05）；Logistic回归分析，cyclinD1对病情的预测有统计学意义（p。 进展组：初次发病；或出现新的转移灶；和/或有可观察肿块增大25%，肿瘤标志物任何一项增高(+++)以上并持续3个月以上者。 1.3 主要试剂和仪器:鼠抗人cyclinD1、P16、P27单克隆抗体(1：100)购自福州迈新生物技术开发有限公司，异硫氰酸荧光素(F1TC)羊抗鼠IgG(1：400)购自北京华美生物技术开发有限公司，流式细胞仪为美国BD公司FACS420型。 1.4 实验方法。 1.4.1 取样。稳定组在治疗4个周期后经影像学和实体瘤疗效评价达稳定时，抽血；进展组经影像学和实体瘤疗效评价为进展时，抽血。在清晨、空腹、静卧条件下,取外周血2mL,注入盛有0.01mL0.1%乙二胺四乙酸二钠抗凝剂的试管中混匀。 1.4.2 实验步骤。取抗凝外周血2ml，用国产淋巴细胞分离液分离人抗凝外周血中的淋巴细胞，用PBS洗涤，洗涤后用70％乙醇固定过夜。离心去除乙醇，用PBS洗涤，调节细胞浓度为1×10?6/ml。穿透，加入一抗(使用鼠抗人cyclinD1、P16、P27单克隆抗体)、二抗(FTTC-IgG抗体)，加入1mlPBS缓冲液，并设同型阴性对照．样品放在0~4℃环境中．准备上机检测。l5mW氩离子激光．激光波长488nm。用CellGuest软件自动取每个样品×10?4个细胞并分析结果，记录样品的荧光指数(FI值)。 1.5 统计方法。用SPSS13.0软件包进行统计学处理，实验数据计量资料以(X±S)表示，进行正态及方差齐性检验，结果采用两独立样本t检验，计数资料的比较采用卡方检验，p0.05）。 2.3外周血淋巴细胞中cyclinD1、P16、P27表达水平的相关性分析采用Pearson相关分析cyclinD1、P16、P27各指标的相关性，见表4。 表4的结果示：外周血淋巴细胞cyclinD1、P16之间成正相关，相关系数为0.73（p0.05）。 2.4 疾病病情认知的多因素分析。对以上判断疾病病情有意义的单因素进一步做Logistic回归分析，筛选最能预测疾病病情的因素，见表5 表5的结果示：cyclinD1进入回归方程，cyclinD1对疾病病情的判断有统计学意义（p0.05）。? 3 讨论 随着对细胞周期调控认识的不断深入，出现了“癌症可能是一类细胞周期疾病（cellcycledisease）”的观点[2]。近来的研究已表明，细胞周期调节失控是肿瘤发生、发展中重要的分子事件[3]。 任何因素导致细胞周期中的正负调节因子：细胞周期蛋白(cyclin)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(CKI)失去平衡，出现cyclin过表达或CKI失表达、失活均可能引起细胞增殖失控产生肿瘤。cyclinD1是细胞周期蛋白中一种重要的正性调节因子，与CDKs结合促进细胞从G1期进入S期，而P16、P27是CKIs家族中重要的负性调节因子，主要阻抑细胞于G1期，防止细胞冲破G1→S限制点过度增值，阻止肿瘤形成[4]。 近年来，大量研究者从基础医学到临床各个角度进行研究，众多学者发现外周血循环肿瘤标志物及免疫系统相关抗原的分子生物学检测能够较好并较早的反映机体肿瘤组织的生物学行为[5~8]，鉴于对肿瘤浸润淋巴细胞的检测受到标本的限制，外周血淋巴细胞的易抽取、患者易接受及检测方便和可动态观察等优越性，本文从外周血淋巴细胞表达抗原的变化角度，探讨抗原的变化与肿瘤临床生物学进展的关系。 在人类的甲状腺癌、乳腺癌、食管癌以及直肠癌中均发现CyclinD1基因扩增和蛋白过度表达，提示CyclinD1基因和蛋白的表达异常与肿瘤的发生相关[9,10]。本研究显示52例稳定及34例进展期的癌症患者外周血淋巴细胞中，cyclinD1蛋白进展组明显高于稳定组（p 在多种肿瘤组织中，都可以见到p16蛋白失表达[11],但p16异常的发生率在不同组织起源的肿瘤中差异较大。有学者认为p16变异在胃癌中频发，也有学者认为并不常见，