第六章 蛋白质分离纯化与表征.pptVIP

第六章 蛋白质的分离纯化和表征; 一、 蛋白质的性质; 2. 蛋白质的大分子特性 a 渗透与渗透压 溶剂分子由稀溶液向浓溶液单方面的净移动称为称为渗透。 渗透压是溶液分子在平衡浓度时的净水压，是蛋白质的依数性之一。 ;萍株硫擅妥洗翘君衫硼蹋拣茹漾焊点奉缘孤煽荒盘瞻违纹痛惑乙撰跺扁次第六章 蛋白质的分离纯化和表征第六章 蛋白质的分离纯化和表征; b 蛋白质分子的扩散现象 由于浓度差导致的溶质分子的净迁移，称为扩散。 扩散系数的大小与蛋白质形状、大小及溶剂的粘度有关。 c 蛋白质分子的沉降特性 蛋白质分子在溶液中受到强大的离心力作用时发生移动的现象称为沉降。 沉降的速度与蛋白质分子的大小、形状、密度及溶剂的密度和粘度、温度等有关。 沉降系数用S做??位。 ; d 蛋白质的胶体性质及沉淀 分散相质点的半径介于1- 100nm时形成的均匀分散的溶液，称为胶体溶液。 蛋白质溶液作为胶体溶液，稳定的原因是蛋白质分子表面的水化层和双电层。 沉淀蛋白质的方法： 大量的中性盐、 极性有机溶剂、 重金属盐、 生物碱试剂、 加热; 二、 蛋白质的分离纯化方法;凝 胶 过 滤 层 析 原 理 示 意 图; （二） 利用溶解度差别纯化蛋白质 蛋白质的溶解度受到溶液的pH、离子强度、 介电常数和温度等因素的影响，所以改变以上条 件，可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分 的溶解度，达到分离纯化蛋白质的目的。 1. 通过改变溶液pH值的等电点沉淀法 2. 通过改变溶液离子强度的盐析、盐溶 3. 有机溶剂的分级沉淀 4. 通过改变温度的沉淀法 ; （三） 根据电荷不同纯化蛋白质 1. 电泳 纸电泳或薄膜电泳 粉末电泳 细丝电泳 凝胶电泳; ;浓缩胶; （2） 等电聚焦电泳(IEF); 两性电解质载体 ampholite; （3） SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS);苍樟酚秋叼爸跳绕影剁篓济至案乞朴捧倡鹿萎祟预姨盖饱抬盂傀怪撅爬换第六章 蛋白质的分离纯化和表征第六章 蛋白质的分离纯化和表征; 2. 离子交换层析 纤维素离子交换层析 交链葡聚糖离子交换层析 ; （三）根据对配基的生物学特性的分离： 亲和层析 亲和层析是利用生物亲和力，即蛋白质分子和其配基之间特有的识别能力而建立的一种纯化方法。 ;三、 蛋白质分子量的测定方法; 4. 凝胶过滤法测相对分子量; 5. SDS测相对分子量