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重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A 的原核表达
# 954 # Chinese Journal of Pathoph siolog 2004, 20( 6) : 954- 959
[ ] 1000- 4718( 2004) 06- 0954- 06
A *
冉延超, 王一飞 , 熊 盛, 张美英, 黄文韬, 罗林波, 刘秋英
( , 510632)
[ ] : , , NDPK- A , 6
His , : nm23- H1
pBVNMH 1 pQE40 ; ;
; Western blot ; HPLC ;
: pQE- 40 nm23- H1 ; 496% ;
NDPK- A ; 472U/ mg; :
p QE - nm23H1 NDPK- A, , NDPK- A
[ ] ;
[ ] R363 [ ] A
( nucleoside diphosphate kinase, ,
NDPK) ,
, , ,
[ 1]
, rhNDPK- A ,
[2, 3] [ 4]
,
, 6 His
NDPK , M 15[ pQE40] , rhNDPK
, - A , , 6 His
NDPK nm23, nm23 - H1 + +
Ni - NTA Ni -
nm23- H2 , nm23- H1 NTA 6 His ,
, nm23- H2 nm23- H1 , , Ni
NDPK- A , , ,
, ,
E . coli DH5[ pBVNMH1] ,
NDPK- A[ 5, 6] 42% ,
cibacron blue 3GA rhNDPK- A
rhNDPK- A cibacron blue 3GA
,
, rhNDPK- A 1
cibacron blue 3GA, 11 质粒菌种及胚蛋 pBVNMH1
E . coli DH5E . coli M15 [ pREP4]
[ ] 2003- 10- 31 [ ] 2004- 02- 19 pQE - 40 QIAGEN (
* [ ] ( 3037 1661) ; )
( A1090207) ;
12 引物 nm23- H1 p1: 5! -
( 99- Z- 007- 01) ;
CTAGGATCCGCCAACTGTGAGCGTACCTT C- 3! ,
( 692002)
Tel: 020- E- mail: twang f @ jnu. edu. BamHI ; p2: 5∀- GATG
cn GTACCTCATTCATAGATCCAGTTCTG- 3∀,
# 955 #
KpnI , DAB
13 主要试 28 纯化产物的磷酸激酶活性测定
[5]
DNA Takara NDPK- A
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