及其免疫原性研究-中国眼耳鼻喉科杂志-复旦大学.PDF

212 ·研究生专栏· 肺炎链球菌自溶素核酸疫苗的制备 及其免疫原性研究△ 徐江红王正敏陈兵章德广戴文佳朱美美徐晨媚 【摘要】 目的构建肺炎链球菌自溶素(pneumococcalautolysin，LytA)核酸疫苗，并研究其免疫原性。方 法采用聚合酶链反应方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因，然后将该基因插入到pVAXl 真核表达载体中，构建表达LytA的重组质粒，制备成超螺旋比例大于90％的核酸疫苗。实验组：BALB／c小鼠 5只，对其分3次肌内注射核酸疫苗(100Ixg)；对照组：BALB／c小鼠5只，肌内注射pVAXI空载体(100雌)3 次。分别采集小鼠血清，采用间接酶联免疫吸附方法测定血清LytA特异性抗体水平。结果扩增出的LytA 基因(957 bp)与基因库中LytA的编码序列(957bp)一致。成功构建了LytA核酸疫苗。实验组小鼠的血清Ly— tA抗体水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P0．01)。结论成功克隆了LytA基因，制备了LytA核酸 疫苗，后者可在小鼠体内诱导较强的特异性体液免疫反应。(中国眼耳鼻喉科杂志，2009，9：212-214) 【关键词】 中耳炎；链球菌，肺炎；疫苗；DNA of DNAvaccineand ofits XU immunogenicity Preparationstreptococcuspneumocoecalautolysin study Jiang- 7lo，lg，WANGZheng-min，CHENBing，ZHANGDe-guang，DAIWen-jia，ZHUMei—mei，XUC舱n-mei．Departmentof 200031，China Otorhinolaryngology，FudanUmvers@，Shanghai author：WANG Corresponding Zheng-min，Email：0swzm@glIlail．eom construct vaccineandto To its 【Abstract】Objective pneumococcalautolysin(LytA)DNAstudyinmmnogenicity． MethodsThe was fromthe chainreactionandthenwas LytA amplified bypolymerase gene pneumococcalgenome insertedintothe vector to therecombinant BALB／c construct eukaryotieexpressionpVAXl expressionplasmid．The micewere with DNA the with intramuscularlyinjectedLytA vaccine(100斗g)inexpe—mentalgroup(／／,=5)orpVAXI thecontrol 3times levelwasmeasuredthe (100峙)in group(，l=5)forrespectively．TheLytA—specificantibody by immunosorbentmethod．ResultsTheDNA ofthecloned consistent enzyme-linked assay se