Stbl4感受态细胞.PDFVIP

Stbl4 感受态细胞 目录号：BC115 储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。 组成 BC115-01 Stbl4 Competent cells 20×100μl pUC19 0.1ng/μl 5μl （ ） 产品说明： Stbl4菌株来源于Stbl2菌株 （Stbl2为JM109衍生菌株），用于克隆不稳定序列 （如重复序列，逆转录病 毒序列等)和甲基化的DNA序列，特别适合构建重组逆转录病毒或慢病毒质粒。可用于大质粒的构建和扩增， 适用于构建和扩增质粒cDNA文库。区别于Stbl2菌株，Stbl4 菌株在IPTG和X-gal存在的条件下，可进行α 8 互补原理的蓝白斑筛选实验。感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于10 cfu/μgDNA。 基因型： mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal- thi-1 supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ R lacIqZΔM15Tn10(Tet ) 菌株抗性：对氨苄青霉素，卡那霉素，壮观霉素敏感。对四环素有抗性。 质粒转化步骤： 1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl 含有1-100ng 的质粒DNA或5-10μl连 接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀； 2. 冰水浴中放置15-30 分钟，不要晃动； 3. 42℃热击60秒钟，不要晃动； 4. 冰水浴中放置2 分钟，不要晃动； 5. 加入500μl 的室温的SOC或LB培养基； 6. 置于37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养60分钟； 7. 取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-18小时。 (当克隆不稳定片段时，为了降低重组错误率，复苏培养和涂布培养最好采用30℃的培养条件，平板在 30℃培养时需要24小时左右。） （平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心30秒钟，弃掉上清，留100μl 左右的液体，用200μl 吸头轻轻吹打散菌块，取10μl 重悬的菌液分多点滴在抗性LB平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平 板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）