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激光细胞融合术 主要内容 研究目的和意义 发展历史 讨论与分析 主要特点 应用 1. 细胞融合的目的和意义 细胞融合是指利用化学或物理方法把两个或多个紧连的细胞融合成一个细胞的技术，也称为体细胞杂交，是细胞工程的重要内容之一，是一种在细胞水平上的遗传操纵。 细胞融合有别于将一个细胞的细胞核移入同种或异种去核成熟卵内的核移植技术。 细胞融合的目的和意义 细胞融合能把亲缘关系较远，甚至毫无亲缘关系的生物体细胞融合在一起，为远缘杂交架起了桥梁，是改善细胞遗传物质的有力手段。 它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限，扩大了遗传物质的重组范围。 融合方法 病毒融合法 聚乙二醇 （PEG）法 电融合法 微束激光融合法 一般过程 聚乙二醇 （PEG）法 一般过程 一般是用人工的方法，即利用各种融合剂如：仙台病毒或聚乙二醇(PEG)等，把两个邻接的细胞界膜溶解掉，使二个或二个以上的细胞合并成一个细胞。最初两个细胞只有胞浆合在一起，核各自独立，这种细胞叫异型核合胞体。经过培养，通过有丝分裂两种亲细胞的染色体才彼此混合在一起，分到两个子细胞核里去，再经过胞浆的分裂，变成两个单核杂交细胞(见图)。 细胞在融合过程中的主要变化： 呈致密状态的体细胞在促融合剂的作用下，细胞膜的性质发生变化； 首先，出现细胞凝集现象；然后，部分凝集细胞之间的膜发生粘连； 继而，融合形成多核细胞； 细胞在融合过程中的主要变化： 在培养过程中多核细胞又进行核的融合而成为单核的杂种细胞 而那些不能形成单核的融合细胞在培养过程中逐渐死亡。 融合结果 细胞融合的结果是一个细胞含有两个或多个细胞核，这细胞称为多核体。 如果细胞中所含有的核,只来自一种亲本型，就称为同核体。 如果细胞中所含有的核,来自两种亲本型，就称为异核体。 以往方法的缺点 以前建立的各种病毒、化学融合的方法，无法实现所选定的细胞间的特异融合，且化学融合剂有毒，需要用紫外光消毒。 以往方法的缺点 电融合技术把细胞聚集接触和膜结构扰动及融合分为两步，使特异性融合成为可能。但由于电脉冲的特异性，因此，特异性只能发生在细胞聚集时，使这种特异造成的膜的可逆击穿不具有选择性，特异性受到很大的约束，且电融法易造成细胞损伤，影响合成细胞的融合。 以往方法的缺点 因此，激光细胞融合法应运而生，它避免了上述两种方法的缺点。 激光细胞融合法（定义） 激光细胞融合技术是采用高峰值密度的激光对两细胞接触处的质膜进行辐照，质膜发生光击穿，可产生微米数量级的微孔。 由于质膜的微孔是可逆的，质膜分子在重组过程中借助细胞连接表面的高张力（小孔表面的曲率很大），细胞逐渐从哑铃壮变为圆球状，两个细胞就融合了。 2.发展历史 早在1838年Muller在肿瘤组织切片中就观察到细胞融合的现象，以后陆续有人报道。但从1838—1958这一时期，人们只对这种自然存在的细胞融合现象进行描述和推测。 发展历史 自从1958年冈田善雄在偶然的机会中发现了仙台病毒能诱导小鼠腹腔艾氏腹水癌细胞融合，继而做了一系列工作，因而为体外诱导细胞融合打下方法学基础。 发展历史 1965年 Harris ＆Watkin在此基础上利用紫外线灭活的仙台病毒诱导不同种动物的细胞融合成功，并证明这种融合细胞能存活。同时Letterfield又利用二种具有不同酶缺陷的细胞融合，并用选择培养基成功地选出杂交细胞，因此细胞融合的试验性工作才开始蓬勃发展。 发展历史 1973年童第周教授把此技术引进我国，并利用大鼠瓦克肉瘤细胞与鸡红血球的杂交细胞，开展了肿瘤免疫实验。 发展历史 1987年联邦德国海得堡理化研究所首次报道用激光法诱导哺乳动物细胞融合和植物原生质融合。 1990年我国张闻迪用激光微束诱导动物卵细胞融合成功。 1992年卜宗式用激光微束诱导金盏菊原生质体融合，获初步成功 发展历史 在短短的十几年里，细胞融合技术的发展迅猛异常，现在不但可以用种内、种间、属间，甚至动植物细胞之间也可以融合。此外还可以用人工细胞进行融合，因而为细胞重组和细胞工程开劈了广阔的研究领域。 3.讨论与分析3.1 定义 细胞融合实际上是以某种手段改变两个细胞接触处质膜的通透性，使两个细胞的内含物相互混合而成为一个细胞的过程。 激光细胞融合就是利用激光微束对相邻的细胞膜进行破坏（或扰动）来诱导细胞融合。 激光细胞融合 激光细胞融合技术是采用高峰值密度的激光对两细胞接触处的质膜进行辐照，质膜发生光击穿，可产生微米数量级的微孔。由于质膜的微孔是可逆的，质膜分子在重组过程中借助细胞连接表面的高张力（小孔表面的曲率很大），细胞逐渐从哑铃壮变为圆球状，两个细