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生物分离过程的一般流程 原料液 细胞分离 (离心，过滤) 路线一 路线二 细胞－胞内产物 清液－胞外产物 路线一B 细胞破碎 路线一A 包含体 碎片分离 溶解 (加盐酸胍、脲) 粗分离 (沉淀/超过滤/萃取) 复性 纯化 (层析、离子交换、吸附) 脱盐 (凝胶过滤、超滤) 浓缩 (超滤) 精制 (结晶、干燥) 通过本章学习应掌握以下内容 1. 什么是沉淀法？ 2. 沉淀法纯化蛋白质的优点有哪些？ 3. 常用的沉淀方法包括哪些？ 4. 何谓盐析？其原理是什么？ 5. 6. 有机溶剂沉淀法的原理是什么？ 7. 影响有机溶剂沉析的主要因素有哪些？ 8. 等电点沉析的工作原理是什么？ 16.1 概述 沉淀：利用沉析剂使生化物质在溶液中的溶解度降低 而形成无定形固体沉淀的过程。 沉淀法的目的： 通过沉淀达到浓缩的目的； 沉淀方法可有选择地沉淀杂质或有选择地沉淀所需 成分，初步 纯化 ； 将已纯化的产品由液态变成固态，加以保存或进一 步处理。 沉淀法是最古老的分离和纯化生物物质的方法，但目 前仍广泛应用在工业上和实验室中。 3.1 概述 沉淀法的原理： 生物分子在水中形成稳定的溶液是有条件的， 这些就是溶液的各种理化参数。任何能够影响 这些条件的因素都会破坏溶液的稳定性。 沉淀法基本原理就是采用适当的措施改变溶液 的理化参数，控制溶液的各种成分的溶解度， 根据不同物质在溶剂中的溶解度不同而达到分 离的目的， 溶剂组分的改变或加入某些沉淀剂以及改变溶 液的pH值、离子强度和极性都会使溶质的溶解 度产生明显的改变。 概述 n 沉淀操作常在发酵液经过过滤和离心（除 去不溶性杂质及细胞碎片）以后进行，得到的 沉析物可直接干燥制得成品或经进一步提纯， 如透析、超滤、层析或结晶制得高纯度生化产 品。 n 操作方式可分连续法或间歇法两种，规模较小 时，常采用间歇法。不管哪一种方式操作步骤 通常按三步进行： 概述 沉淀法操作步骤 ： ① 首先加入沉淀剂， ② 沉淀剂的陈化，促进粒子生长； ③ 离心或过滤，收集沉淀物。 加沉淀剂的方式和陈化条件对产物的纯度、 收率和沉淀物的形状都有很大影响。 沉淀生成动力学 溶解度值的降低是一个动力学过程。当体系变得不 稳定以后，分子互相碰撞并产生聚并作用。通常认 为相互碰撞由下面几种运动引起： ①热运动，Bromnian运动； ②对流运动，由机械搅拌产生； ③差示沉降，由颗粒自由沉降速度不同造成的。 沉淀生成动力学 为了简化沉淀过程动力学， 可把沉淀过程分成下述６个步骤： n (1) 初始混合 n (2) 新相生成 n (3) 布朗运动凝集 n (4) 机械碰撞凝集 n (5) 聚集体陈化 n (6) 聚集体沉淀 概 述 沉淀法不仅用于实验室中，因其不需专门设备， 且易于放大，也广泛用于生产的制备过程， 是分离纯化生物大分子，特别是制备蛋白质和酶 时最常用的方法。 优点：操作简单、经济、浓缩倍数高 缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择 性不强 沉淀法的分类 根据所加入的沉淀剂的不同，沉淀法可以分为： （1）