HPLC法测定二色补血草中没食子酸含量.doc

HPLC法测定二色补血草中没食子酸含量（陕西中医学院，陕西 咸阳 712046）?? 摘 要：目的：建立二色补血草中没食子酸的含量测定方法。方法：用HPLC法测定，流动相为甲醇-0.1％磷酸（5∶95）；检测波长273nm。结果：没食子酸在125.1ng～750.6ng之间呈良好线性关系。平均回收率（n=6）为99.86%，RSD=0.66%。结论：该方法稳定可靠，重现性好，可用于二色补血草中没食子酸的含量测定。? 关键词：HPLC法；二色补血草；没食子酸? 中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0033-02? 二色补血草又名燎眉蒿、扫帚草、匙叶草、血见愁、秃子花、苍蝇花、白花菜棵，为白花丹科（Plumbaginaceae）补血草属植物二色补血草［Limonium bicolor （Bunge） Kuntze］带根全草。性平，味甘苦。具有补血、止血、散瘀、调经、益脾、健胃等功效；主治崩漏、尿血、月经不调等。二色补血草的化学成分十分复杂，含有氨基酸、无机元素、维生素、黄酮类、鞣质、多糖、生物碱、有机酸等多种成分[1，2]，其中没食子酸具有显著的消炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的生长[3，4]。本实验采用HPLC法测定了二色补血草中没食子酸的含量，结果表明，该方法简便快速，稳定可靠。? 1 仪器与试药? 1.1 仪器? LC-2010A型高效液相色谱仪（岛津有限公司），Hypersil ODS（25um，4.6 mm×250 mm）色谱柱，电子天平（萨多利斯GB204，瑞典）。? 1.2 试药? 二色补血草，购自陕西眉县，经陕西中医学院生药教研室王继涛教授鉴定为白花丹科二色补血草［Limonium bicolor （Bunge） Kuntze］的全草。没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100831-200302）。甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。? 2 方法与结果[5，6]? 2.1 色谱条件? 色谱柱：Hypersil ODS（250nm×4.6nm，5μm）；流动相：甲醇-0.1％磷酸（5：95）；检测波长：273nm；流速：1mL/min；柱温：室温。? 2.2 对照品溶液的制备? 精密称取没食子对照品6.255mg，置于50mL量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，摇匀，即得（每1mL含没食子酸0.1251mg）。? 2.3 供试品溶液的制备? 取二色补血草2.5g，精密称定，加50％甲醇适量，加热回流提取2h，过滤，滤液蒸干，残渣用50%甲醇溶解置25mL量瓶中，50%甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。? 2.4 标准曲线的绘制? 精密吸取对照品溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL，分别置于10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，照高效液相色谱法（《中国药典》2005版一部，附录Ⅵ D）测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2959.5X-11264，r=0.9999。结果表明，没食子酸在125.1ng～750.6ng之间呈良好线性关系。? 2.5 稳定性试验? 取同一供试品溶液，分别在0、30、60、90、120min进样，测定没食子酸的含量，其RSD值为0.41％，结果表明：供试品溶液在2h内稳定性良好。? 2.6 精密度试验? 取同一供试品溶液，重复进样5次，测定没食子酸的含量，其RSD值为0.62％，结果表明，仪器精密度良好。? 2.7 重现性试验? 取样品适量（5份），精密称取，分别按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件，测定没食子酸含量，其RSD值为0.45％，结果表明，本方法重现性良好。? 2.8 回收率试验? 精密称取已知含量（0.057%）的样品6份，分别精密加入一定量的没食子酸对照品溶液（每1mL中含没食子酸0.1251mg），按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件，测定没食子酸含量，平均回收率为99.86%，RSD值为0.66％，结果见表1。? 2.9 样品的含量测定? 吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按2.2项下的色谱条件测定，记录峰面积，由回归方程计算没食子酸量的含量。见表2。? 3 结论? （1）由于没食子酸的极性相对较大，为了与其它物质较好分离，必须使用极性大的流动相。通过流动相的考察，确定甲醇-0.1%磷酸溶液（5∶95）。?