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大鼠急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡探究【摘要】目的：探讨急性胰腺炎严重程度与胰腺腺泡细胞凋亡的关系。方法：牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制作不同程度的AP模型，原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠胰腺腺泡细胞凋亡率。结果：对照组凋亡细胞很少，AEP组存在较多的细胞凋亡， ANP组凋亡指数较低，两组之间差别有显著性。结论：胰腺腺泡细胞凋亡与急性胰腺炎严重程度呈负相关。 【关键词】细胞凋亡；急性胰腺炎；大鼠 文章编号：1009-5519（2007）08-1110-02 中图分类号：R363 文献标识码：A 急性胰腺炎（AP）发病机理仍然不十分清楚。尤其是急性坏死性胰腺炎（ANP）仍有较高的病死率及并发症发生率。细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种重要机制，近年来细胞凋亡在AP发生发展过程中的作用引起人们的重视。本实验使用原位末端标记法（TUNEL）检测AP大鼠胰腺腺泡细胞凋亡指数，探讨AP发病过程与胰腺腺泡细胞凋亡的关系。 1 材料与方法 1.1 动物分组与模型制备：健康Wistar大鼠42只（购自吉林大学医学部实验动物中心），雌雄各半，体重250~300 g。随机分成对照组6只，急性水肿性胰腺炎组（AEP）18只，ANP组18只。参照Aho[1]的方法制作动物模型：大鼠术前禁食12小时，麻醉后剖腹，牛磺胆酸钠（Sigma公司）逆行胰胆管注射，制作AP模型，（AEP组0.5?、1 ml/kg；ANP组5%、1 ml/kg）正常对照组仅开腹翻动胰腺。 1.2 观察指标及方法：分别于术后2、6、12小时各时相点处死AEP、ANP组大鼠，术后6小时处死对照组大鼠，取相同部位胰腺组织用10%福尔马林液固定，常规制作病理HE切片。光镜下观察胰腺组织病理学改变，参照Schm idt[2]的方法对胰腺组织进行评分。应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的原位末端标记法（TUNEL）检测胰腺腺泡细胞凋亡(试剂盒购自Boehringer Mannheim公司)。操作步骤按说明书进行，每张切片随机选择5～10个高倍视野，记数1000个腺泡细胞中的凋亡细胞，用百分数表示，作为凋亡指数(apoptosis inder，AI)。 1.3 统计学处理：采用SPSS10.0软件进行t检验及方差分析，对AI与胰腺炎严重程度进行相关性分析。 2 结果 2.1 光镜下胰腺组织病理学改变：对照组胰腺组织未见明显异常。AEP组尤其是ANP组胰腺组织发生了明显的病理变化，AEP组各时相点均表现为胰腺间质充血、水肿，少量单核细胞及中性粒细胞浸润，未见出血及坏死灶；ANP 2小时组胰腺组织间质水肿，发现散在的腺泡坏死灶；ANP 6小时组胰腺实质内见少量出血和坏死，小静脉扩张，部分胰管破坏，红细胞沉积；12小时组胰腺实质大片坏死，间质出血伴有脂肪坏死及大量中性粒细胞浸润，血管扩张（见表1）。 2.2 各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡检测：对照组仅见到很少的凋亡细胞；AEP组存在较多的细胞凋亡，而且随着时间的延长，凋亡指数逐渐增高；ANP组凋亡指数逐渐降低，两组之间差异有显著性（见表2）。 3 讨论 AP特别是ANP的治疗一直是临床的一大难题，较高的死亡率及并发症发生率仍然困扰着临床医生。究其原因是本病的发病机制并没有完全阐明。白细胞过度激活、微循环障碍、细胞凋亡在胰腺炎发病中的作用正成为研究的焦点，尤其是细胞凋亡与胰腺炎的关系正引起关注。细胞凋亡是由基因控制的细胞自主、有序性的死亡，是一种生理性调节机制，不破坏细胞生存环境。其形态学改变如下：（1）细胞膜完整，体积缩小；（2）核染色质浓缩聚边，最后断裂；（3）细胞器结构基本不受损害；（4）细胞膜出泡，其中包裹有部分细胞器，有或没有核碎片，形成凋亡小体；（5）凋亡小体被吞噬细胞或邻近其他细胞吞噬，不引起炎症反应。而细胞坏死是一种细胞被动死亡的过程，坏死后会释放大量炎性介质及细胞因子，引起全身瀑布样级联反应，破坏细胞生存环境，继而发生全身炎症反应综合征（SIRS）。所以坏死与凋亡有着本质的区别[3]。 Kaiser[4]通过实验研究发现重症胰腺炎标本有大量的坏死组织及脓肿形成，炎症反应重，而只有少量凋亡细胞；而急性水肿性胰腺炎标本则出现大量的胰腺腺泡凋亡细胞，炎症反应轻。由此推测胰腺腺泡细胞的不同死亡方式即细胞凋亡或细胞死亡与胰腺炎的病情轻重有关，胰腺腺泡凋亡与AP严重程度呈负相关，胰腺腺泡细胞凋亡可能是AP发生后对机体较为有利的一种反应。 通过制作大鼠AP模型，采用TdT介导的TUNEL检测胰腺腺泡细胞凋亡。发现：对照组胰腺组织中极少见到胰腺腺泡细胞凋亡；AEP组胰腺腺泡细胞AI较ANP组明显增高，即ANP胰腺腺泡凋亡细胞较少。提示细胞凋亡是AP病变发展过程中的一个重要