RNA干扰技术和其应用.docVIP

RNA干扰技术及其应用 柳满 生物制药1201 1202150124 摘要：1998年Andrew．Fire和Craig C．Mello发现双链RNA可以抑制线虫同源基因的表达使基因沉默，并且沉默可遗传给后代。现将这类小干扰RNA分子可以高效、特异地阻断体内同源基因表达，促使同源mRNA降解，诱使细胞表现出基因缺陷的表型现象称为RNA干扰。本文从RNAi的发现、机制、生物学功能、应用来论述RNAi。转基因沉默现象最初在植物中被发现。RNAi的作用机制：dsRNA进入细胞内被Dicer酶切割成siRNA。siRNA的双链结构被解螺旋与沉默复合物形成复合物，siRNA双链被解开，然后特异性结合到靶RNA上，切割RNA。mRNA剪切过程中新形成的21-23个siRNA又可以进入下一轮循环而达到扩增效应的目的。生物学功能：沉默、机体内源性基因表达。RNAi的应用：基因功能的研究、基因剔除、医学方面的应用、RNAi药物。 关键词：基因沉默 RNAi siRNA miRNA 以前我只知道遗传物质有DNA、RNA，亦只知道RNA的功能是转录。但随着知识的增多，我了解到原来蛋白质也是一种遗传物质，例如Prion蛋白。Prion学说的出现使得蛋白质不仅体现生物学功能，而且可储存遗传信息。 PrPC蛋白高级结构的改变不仅可造成蛋白功能的变化，在某种意义上还是遗传信息传递的方式。我亦知道了不是所有的RNA都是单链的，更知道了RNA的功能不仅仅只是转录。通过学习分子生物学检测技术，我知道了RNA干扰现象的发现、作用机制、应用等。1998年Andrew．Fire和Craig C．Mello发现双链RNA可以抑制线虫同源基因的表达使基因沉默，并且沉默可遗传给后代。现将这类小干扰RNA分子可以高效、特异地阻断体内同源基因表达，促使同源mRNA降解，诱使细胞表现出基因缺陷的表型现象称为RNA干扰。2006年10月2日，瑞典皇家卡罗林斯卡(Karolinska)医学院宣布，将2006年度诺贝尔生理学或医学奖授予两名美国科学家安德鲁·费里(Andrew．Fire)和克拉格·米洛(Craig C．Mello)，以表彰他们在1998年的重要发现。瑞典皇家卡罗林斯卡医学院在颁奖声明中宣称，费里和米洛的发现能解释许多令人困惑、相互矛盾的实验结果，并提示了控制遗传信息流动的自然机制。RNAi的很多领域还是未知的，这有待于我们一代一代人的不断努力，去揭开其神秘的面纱，为我们自己提供更好的医疗条件等。 一.RNA的起源 秀丽新小杆线虫中的RNAi途径 转基因沉默现象最初在植物中被发现。研究人员在植物中导人额外的产生特定色素的基因，试图创造一种深色的花朵，结果发现，所有导入的额外基因连同 内源性基因都被沉默(Napoli et a1．，1990；Van der Krol et a1．，1990)。?III家族中特异识别，后者以一种ATP依赖的方式逐步将dsRNA切割成长21-23个核苷酸的有正反义链组成的双链小分子干扰RNA，且每条单链的3d都带有2个突出的非配对碱基（多数是UU）。siRNA是识别靶RNA的标志，它的生成启动RNAi反应。 2.效应阶段 siRNAs的双链结构需被解螺旋后组装到RNA诱导的沉默复合物中，形成一复合物，此复合物由内切核酸酶、外切核酸酶、解旋酶和同源RNA搜索活性蛋白4种蛋白成分组成。在ATP存在下，该复合物中解旋酶活性将siRNA双链解开，并定位到siRNA的反义链互补的靶RNA转录本上，在距离siRNA双链3端12个碱基的位置切割mRNA. 3.倍增阶段 以往许多实验发现仅需少量siRNA即可引起强烈的同源基因表达抑制，研究者推测在mRNA剪切过程中产生的21-23个核苷酸片段可能会作为新的siRNA而继续参与RNAi过程，从而使干扰作用放大，存在倍增放大机制。 我对于机制简单的理解既：dsRNA进入细胞内被Dicer酶切割成siRNA。siRNA的双链结构被解螺旋与沉默复合物形成复合物，siRNA双链被解开，然后特异性结合到靶RNA上，切割RNA。mRNA剪切过程中新形成的21-23个siRNA又可以进入下一轮循环而达到扩增效应的目的。 关于扩增反应：最近，至少在一些研究中发现扩增反应的存在。次级siRNA可能通过称为过渡性RNAi(transitiveRNAi)的机制产生。其过程可能是siRNA或短的反义RNA可发挥启动特异性依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRP)合成与被靶定序列互补的RNA(cRNA)共同重新合成产生dsRNA的作用，然后通过DCR裂解成新的siRNA。也有新的证据表明有些RdRP也能非常高水平地进行特异性转录或在检测到如病毒入侵的异常RNA存在的情况下不需要启动子就能产生cRNA。最早提出的这种设想是用来