煤焦油洗剂治疗银屑病药效学探究.docVIP

煤焦油洗剂治疗银屑病药效学探究【摘要】目的:探讨煤焦油洗剂治疗银屑病的药效学机制。方法:采用小鼠尾鳞片表皮、鼠阴道上皮实验模型，观察其对上皮细胞分裂及表皮细胞分化的影响；采用豚鼠磷酸组织胺致痒阈模型，观察其抑制瘙痒的作用；采用角叉菜致大鼠足跖肿胀模型，观察其抗炎作用。结果 煤焦油洗剂有显著的抑制小鼠阴道上皮细胞有丝分裂及增殖细胞核抗原表达、促进小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的作用，能显著提高磷酸组织胺对豚鼠的致痒阈，使角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀显著减轻。结论:煤焦油洗剂有抑制角质形成细胞增殖、促进角质形成细胞正常分化、明显抑制瘙痒和急性炎症的作用。 【关键词】煤焦油洗剂;药效学;银屑病 【中图分类号】R468【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)01-0024-03 煤焦油洗剂主要成分为煤焦油，适用于银屑病、神经性皮炎、脂溢性皮炎、脂溢性脱发、头皮屑过多等皮肤病，临床疗效良好。为探讨煤焦油洗剂的药效学机制，笔者对煤焦油洗剂进行了与治疗银屑病相关的药效学研究，现报告如下。? 1 材料和方法 1.1 材料:Wistar种大白鼠，体重200g±20g；昆明种小白鼠，体重20g±2g；白色豚鼠，体重300g±20g；阴道上皮模型用雌性小鼠，鼠尾鳞片模型用雄性小鼠。以上动物由山东鲁抗医药股份有限公司动物中心提供，清洁级动物，普通饲料喂养，动物室温度20~23℃，许可证号SCXK(鲁1%、2%及4%煤焦油洗剂均为自制，复方蒽林软膏为武汉爱民制药有限公司生产，PCNA单克隆抗体由美国NeoMarkers公司生产，SP试剂盒由北京中山生物技术有限公司生产。 1.2 方法。 1.2.1 对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响[1]:取雌性小鼠30只，腹腔注射乙烯雌，0.2mg/只，1次/d，连续3天。第4天将小鼠随机分成5组(n=6)，以生理盐水作为阴性对照、复方蒽林软膏作为阳性对照，分别于上午8时阴道灌注1%、2%及4%煤焦油洗剂、复方蒽林软膏、生理盐水各0.05ml。上午10时给每组小鼠腹腔注射秋水仙碱2mg/kg，并分别再做与前相同的阴道灌注。6h后处死小鼠，切取阴道组织，作常规组织切片，HE染色，在光镜下计数500个小鼠阴道基底细胞中所出现的有丝分裂数，换算成每100个基底细胞的有丝分裂数(分裂指数)。 1.2.2 对小鼠阴道上皮细胞PCNA的影响[1]:取雌性小鼠30只随机分成5组(n=6)，分别做与前相同的雌化及阴道灌注，但不注射秋水仙碱，末次给药后6h处死小鼠，切取阴道组织，作常规石蜡切片，经抗原修复、山羊血清工作液孵育，加入1:100的一抗、室温1h，滴加二抗工作液，辣根过氧化物酶―链霉素卵白素工作液37℃孵育30min。每步骤间均用pH7.4的PBS冲洗3次。用新配制的DABH?2O?2显色。其中以淋巴结为阳性对照，以PBS缓冲液替代一抗作阴性对照。光镜下观察PCNA阳性表达率。PCNA的染色阳性物质呈棕黄色颗粒，主要位于细胞核。采用Garcia半定量分级法[2]：观察10个高倍视野，细胞核棕黄色反应为阳性。①阳性反应着色深度:多数细胞核浅着色为1，深着色边界清楚为2。②阳性着色细胞比例:50%为3级。以上两项相加:2为(+)，3为(2+)，≥4为(3+)。 1.2.3 对小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的影响[2]:取30只雄性小鼠随机分成5组(n=6)，分别以1%、2%及4%煤焦油洗剂、复方蒽林软膏、生理盐水各0.05ml涂抹尾部，2次/d，连续涂药20天后处死小鼠，取鼠尾根部1~3cm表皮，常规组织切片，HE染色，光镜下观察，凡是一个鳞片有连续成行的颗粒层细胞者，判定为有颗粒层形成的鳞片，计数每100个鳞片中有颗粒层的鳞片数(△)。 1.2.4 对角叉菜致大鼠足跖肿胀的影响[3]:取Wistar大鼠，雌雄各半，随机分为5组(n=6)，分别以1%、2%及4%煤焦油洗剂、复方蒽林软膏、生理盐水各0.05ml涂抹每鼠右后肢足跖，2次/d，连续给药5日。末次给药后1h，每鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜混悬液0.1ml/只致炎，以千分尺测量右后足趾致炎后0.5、1、3、5h的厚度，计算各组大鼠足趾肿胀率：肿胀率=(致炎后足跖厚度－致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100％。 1.2.5 对豚鼠磷酸组织胺致痒阈的影响[4]:取豚鼠，雌雄各半，随机分为5组(n=6)，分别以1%、2%及4%煤焦油洗剂、复方蒽林软膏、生理盐水各0.05ml涂抹每鼠每只豚鼠右后足背，2次/d，连续给药5日。末次给药后2小时，每只豚鼠右后足背剃毛，并用粗砂纸擦伤剃脱毛处表皮面积约1cm?2。10分钟后开始在创面滴以0.01％磷酸组织胺溶液0.05ml/只。此后每隔3min滴一