高致病性猪繁殖与呼吸综合征病（.PDF

动物医学进展 ，2008，29(i0)：13—17 ProgressinVeterinaryM edicine 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病 (JX0601)NSP2基 因 主要抗原区域 的原核 达与纯化 李相钊 ，张 志。，王 菲 ，吴发兴 ，路希山 ，张燕霞。，李晓成 ，单 虎 (1．青岛农业大学 ，山东青 岛 266109；2．中国动物卫生与流行病学 中心。山东青 岛 266032) 摘 要：本研究采用PCR方法从高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JXO6O1)质粒扩增得到NSP2基因 的主要抗原决定区域 dNSP2，克隆 目的基因连接到 pGEM-TEasy，再将其亚克隆到pET-32a上，构建表达 载体 pET—dNSP2，然后转化大肠埃希菌BL一21(DE3)，分别用不同浓度的 IPTG诱 导表达，经SDS—PAGE 电 泳分析 ，所表达融合蛋 白的分子质量 约为 38．3ku，用 HisBindPurificationKit试 剂盒 纯化蛋 白，Western blot结果表 明重组蛋白可被 PRRSV 阳性血清所识别。本试验为进一步研究PRRSV诊断试剂盒奠定了基 础 。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；NSP2基因；原核表达 中图分类号 ：$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2008)10—0013—05 2006年 ，在我国南方湖南 、江西、安徽 、江苏、浙 比，HP—PRRSV 的NSP2蛋 白缺失 了大约 3O个氨 毒 表 江 、湖北等省的猪群 中相继暴发 了无名高热。疫情 基酸引起突变[】]，造成毒力增强 ，并且与 PRRSV 的 来势猛，传播快 ，波及范围广 ，各种 品种和各年龄段 普通株几乎没有交叉免疫力，给高致病性PRRS的 的猪均易感染，临床抗生素治疗效果差或无效。在 预防带来 了难度 。 一 些疫区，病死率高达 5O 以上。发病猪体温突然 PRRSV属动脉炎病毒科成员，可引起怀孕母猪 升高至 4l℃～42℃，并连续 出现大量死亡 ，给养猪 繁殖障碍和仔猪呼吸道症状 [2。]。PRRSV基因组为 业造成惨重的打击 ，后证实导致猪无名高热的主要 单股正链 RNA，大小约 15kb，含有 8个开放阅读框 病原为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Highly (ORFs)。其 中 ORF2～7编码 6种结构蛋 白， pathogenic porcine reproductive and respiratory ORF1编码 的聚合蛋 白裂解产生 12个非结构蛋 白 syndromevirus，HP-PRRSV)。与普通 PRRSV相 (NSP1-12)，目前对 NSP2功能研究较多[4]。 收稿 日期 ：2008-08—15 基金项 目：国家科技支撑计划项 目资助 (2OO7BAD86BO5) 作者简介：李相钊 (1981一)．男，山东临沂人。硕士研究生．主要从事动物传染病与生物制品学研究。*通讯作者 崇靠亲靠 StudyonCuituralConditions0fH emophilusparasuiand PathogenicExperimentstoGuineaPigs GAO Peng—cheng，CHU Yue—feng，ZHAO Ping，HE Ying，LU Zhong—xin (KeyLaboratoryoJAnimalVirologyoJMinistryoJAgriculture，StateKeyLaboratoryoJ’VeterinaryEtiologicalBiology。 LunzhouVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyoJAgriculturalSciences，Lanzhou，Gansu，730046．C