荜澄茄及其有效成分柠檬醛抗病原体作用.docVIP

荜澄茄及其有效成分柠檬醛抗病原体作用中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2011)10-0495-03 荜澄茄系樟科木姜子属植物山鸡椒的干燥成熟果实，又名山苍子。中医将其归类于温里药，味辛，性温，归脾、胃、肾、膀胱经，能温中散寒、行气、止痛，用于胃寒呃逆、脘腹冷痛、寒疝、腹痛、寒湿、小便混浊。临床上也将其挥发油用于治疗慢性支气管炎、慢性气管炎和冠心病、脑血栓 [1]。近十几年来，对其抗病原体作用的研究又有了较大进展。 1抗真菌作用 1.1体外抗真菌作用 荜澄茄挥发油是一种强效广谱抗真菌剂，能有效杀灭青霉、草酸青霉、拟青霉、桔青霉、产黄青霉、白色念珠菌、热带念珠菌、付克柔念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克鲁斯念珠菌、黄曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、烟曲霉、日本曲霉、白曲霉、土曲霉、焦曲霉、酵母菌、酵母样菌、毛霉、总状毛霉、根足霉、米根霉、黑根霉、镰孢菌、链格孢霉、枝孢霉、弯孢霉、狗小孢菌、石膏样小芽孢菌、禾谷镰刀霉、尖口镰刀霉、散子囊菌、浊水节霉、木霉、腊叶芽枝霉、新型隐球菌、皮炎着色霉、疣状着色霉、孢小丝菌和石膏样毛癣菌等真菌[1~ 4]。杀菌浓度：气熏平皿法为6×10-5 ml/cm3;直接试管法为1.5×10-3 ml/ml[1]。平板法最低抑菌浓度（MIC）为1.77～2.21 mg/ml，与苯甲酸钠和山梨酸钾不同，荜澄茄挥发油受培养基pH影响很小，其pH活性范围在4.5～8.5之间[2]。 柠檬醛是其抗真菌主要成分[1,3,5,6]。杀菌浓度：气熏平皿法为3×10-5 ml/cm3;直接试管法为7×10-4ml/ml。柠檬醛对糠秕马拉色菌的MIC为7.81 mg/L[7]。荜澄茄和柠檬醛对深部和浅部致病性真菌及非致病性真菌都有明显作用。 1.2抗白色假丝酵母机制 日本学者发现,柠檬醛在25～200 mg/L浓度时只抑制白色念珠菌菌丝体生长、不抑制其酵母型生长，当浓度＞200 mg/L时才明显抑制白色念珠菌酵母型和菌丝体生长[8]。电子显微镜下发现，荜澄茄挥发油在1：1 280浓度时对白色念珠菌的细胞壁和细胞膜均有破坏作用，使胞壁疏松破裂、胞膜丧失、互相融合，最后仅剩下无包裹的菌块。荜澄茄能浓度依赖性抑制同位素标记的胸苷、尿苷、亮氨酸和醋酸钠掺入菌体，推测其挥发油可能通过抑制白色念珠菌的DNA、RNA、蛋白质、胞壁的甘露聚糖、几丁质及胞膜的麦角固醇的合成，从而对细胞壁和细胞膜产生破坏作用[9,10]。 1.3抗黄曲霉机制 罗曼等[6]报道，柠檬醛对豆芽汁琼脂培养基中的黄曲霉的MIC为0.5 mg/L, 最低杀菌浓度为2.0 mg/L。 又报道对马铃薯葡萄糖琼脂培养基中的黄曲霉的MIC为0.5 mg/ml[11]，而谢小梅等[12]报道，对蔡氏培养液中的黄曲霉的MIC为2.6 mg/L。扫描电镜观察到柠檬醛浓度＜MIC时，黄曲霉菌丝扭曲、欲折；分生孢子梗萎缩、表面光滑；分生孢子形态不一、表面变平坦并有粘连趋势；鲜有分生孢子头。当浓度＞MIC时，孢子表面粗糙而疏松，隘痕变浅，有紧缩现象，孢子壁凹凸不平。此时透射电镜观察到细胞壁破坏，变得粗糙、绒毛状、电子密度变低；细胞膜部分萎陷或降解，周质间隙出现电子密集，提示降解产物从细胞壁和细胞膜进入周质间隙，说明壁和膜遭到了柠檬醛损伤。快速显微多道分光光度系统定位分析显示，柠檬醛使黄曲霉细胞壁和质膜的透光量不断增加，由不透光逐步变化到明亮，随着时间的延续，细胞壁和质膜出现纤维丝状编织网，进而细胞表面呈凹凸不平的干瘪状，网上充满瞳孔，表明壁和膜已被触蚀，与电镜观察到的结果一致[6,11]。MIC浓度的柠檬醛使黄曲霉的萌发率由97.5%降至61.4%，黄曲霉菌丝体的电导率（电介质外渗率）增加52.8%，还原糖和蛋白质的利用率分别下降61.3%和44.3%，Na+和K+-ATP酶活性也明显降低，导致菌丝体生长抑制[6]。柠檬醛还浓度依赖性抑制同位素胸苷、尿苷和亮氨酸掺入，提示柠檬醛还通过抑制黄曲霉的DNA、RNA和蛋白质合成产生抗菌效应[12]。 柠檬醛在MIC浓度时也抑制黄曲霉线粒体中的琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶，活性分别呈不可逆性下降27.1%和24.2%，随着浓度升高，活性下降直至消失。以琥珀酸、α-酮戊二酸和丙酮酸为底物时，线粒体呼吸速率分别下降24.1%、14.3%和36.1%，从而阻碍线粒体的氧化还原系统和能量代谢系统，扫描和透射电镜都观察到线粒体受损，形状不规则、结构无序和表面粗糙以及异常线粒体数量增加。进一步研究发现，柠檬醛可能是通过诱生自由基损伤黄曲霉细胞核内有关线粒体的DNA复制系统，使其线粒体发生畸变而失去正常结构和功能[11,13,14]。 1.4抗黄曲霉毒素作用