菌落总数测定ppt.pptVIP

食品卫生微生物学检验菌落总数测定 严纪文 菌落总数测定 菌落的概念： 菌落（colony）是指细菌在固体培养基上经培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落，它是由数以万计的相同细菌集聚而成的。 菌落总数的定义： 样品经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。所得结果包括一群在方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。 卫生学意义： 菌落总数主要作为判定样品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察样品中细菌的性质和繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学综合评价时提供科学依据。 主要修订内容 培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂。 菌落计数公式进行了修改。 添加了关于蔓延菌落的描述。 添加了PetrifilmTM 细菌总数检验测试片法。 添加了拍打式均质器或等效的设备。 第一法 平板计数法 样品处理添加了拍打式均质器或等效的设备 菌落总数的检验程序图 样品的稀释 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。 根据对样品污染状况的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。 及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL）。 培养 琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，cfu）表示。 选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 平板内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，则应将每条链（不同来源）作为一个菌落计。 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板上菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 菌落总数的报告 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约。 大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可以用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约采用两位有效数字。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 称重取样以cfu/g为单位报告，体积取样以cfu/mL为单位报告。 菌落总数计算公式的改变 统计学依据： 平板菌落数越多，结果越具有代表性； （不考虑稀释倍数和培养基的营养状况等） 取样量越大，结果越具有代表性； （同等取样条件、排除其他方面的干扰因素） 计算公式 公式使用的前提：有两个连续稀释度在适宜计数范围内（30～300个菌落数） N = ∑C / [n1 + (0.1 × n2