anti-her2scfv-gfp融合蛋白在大肠杆菌中的....pdfVIP

第4I卷第3期 温卅I 医学院学报 V01．41No．3 201 1年5月 JournalofWenzhouMedical 2011 College May ll Anti-HER2 ScFv—GFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达 及其靶向结合乳腺癌细胞的初步分析 高国辉1，黄奇迪2，王金丹1，杨水兵1，杨娟3，张凤立。，胡孝渠。 (1．温州医学院生命科学院，浙江温州325035；2．温州医学院附属第一医院肿瘤外科，浙江 温州325000；3．温州医学院仁济学院，浙江温州325035) [摘要]目的：构建原核表达系统诱导获得携带绿色荧光的抗人表皮生长因子受体2(humanepidermal growthfactorreceptor 2，HER2)单链抗体，分析其靶向结合HER2阳性肿瘤细胞的功能，探讨其应用 于HER2阳性肿瘤分子诊断与靶向治疗的可能性。方法：将绿色荧光蛋白基因与鼠源性人抗HER2单链抗体 His 基因拼接成融合基因anti—HER2ScFv—GFP，构建原核表达载体重组子pBADB／anti．HER2．ScFv—GFP， 转入大肠杆菌E．coliTOPl0诱导表达，SDS—PAGE和WesternBlot法鉴定，Ni”·NTA亲和层析法纯化获 得目的融合蛋白。将不同浓度的融合蛋白anti—HER2ScFv—GFP分别与HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3、HER2 539 阴性的MCF7混合，观察绿色荧光在不同癌细胞表面的分布。结果：成功获得长度为1bp的融合基因， His 原核表达系统pBAD B／antl．HER2一ScFv—GFP／TOPIO成功构建并表达携带绿色荧光的抗HER2单链抗体， 融合蛋白相对分子量大小约60kDa。HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光，细胞有皱缩现象，而 HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光。结论：携带绿色荧光的抗HER2单链抗体能牢固结合在HER2阳性的乳腺 癌细胞SKBR3表面，绿色荧光可以起到报告作用。 [关键词]抗HER2单链抗体；绿色荧光蛋白；融合蛋白；原核表达；靶向治疗；乳腺肿瘤 [中图分类号]R730．43[文献标识码]A[文章编号]1000-2138(2011)03-0209-05 ofthefusion anti—HER2ScFv—GFPinE．coliandthe of Expression protein analysistargeting functiononthesurfaceofthebreastcancercellsGAO binding Guohui’，HUANGQidi，WANG r． *SchoolofLife Jindan，YANGShuJbYng，YANGJuan，ZHANGFengli，HUXJaoq Sciences，Wenzhou Medlcal College，Wenzhou，325035 constructthe His ObJective：To prokaryoticexpressionsystempBAD B／anti— and thefusion anti-human factor get protein epidermalgrowth r