PCR快速检测犬瘟热病毒方法的研究.PDFVIP

维普资讯 医堂 屋 ．biomed．net．cn ProgressinModernBiome~cnie 2007 Vo1．7 No．2 ．265 ． · 技 术 与 方 法 · Real—timeTaqManRT—PCR快速检测犬瘟热病毒方法的研究木 王君玮 孙承英 姜 平 王志亮 张 维 李 林 赵永刚 王 珊 任炜杰 (1南京农业大学动物医学院 南京210095；2中国动物卫生与流行病学中心 青岛266ll4) 摘要 ：按照犬瘟热(CDV)N基因序列，设计合成了特异性 引物和探针，经各反应条件的优化，建立了Real—time荧光定量 RT—PCR 技术，对细胞培养物、肝脏、肺脏 、脑、脾脏、淋巴结以及鼻腔拭子等组织病料中的CDV进行了特异性检测和敏感性试验。同时，利 用建立的Real—time荧光定量 RT—PCR方法与常规 RT—PCR以及韩国BIOINDIST生产的BITRAPIDCDV检测试剂盒对 57份临 床样品进行了检测。结果：用 20pmol／mL的引物浓度各 luL和20pmol／mL的探针浓度 0，3uL，获得的荧光信号最强，曲线平滑。敏 感性高，可检测到 l，24x10--3ng／uL的病毒RNA；特异性强，与NDV、AIV、NiPV等RNA病毒不发生交叉反应。试验重复性的变 异系数 (CV)分别为2．3％、2．5％和4，2％；与常规 RT—PCR和BIOINDIST生产的BITAR PIDCDV检测试剂盒相比较，该方法具 有快速、特异、敏感、可定量，并可同时检测大量样品等优点。 关键词：犬瘟热病毒；荧光定量RT—PCR；Real—timePCR；检测 中图分类号 ：$858，292，$858，92 文献 标识码 ：B 文章编 号 ：1673—6273(2007)02—0265—04 StudyonRapidTestMethodf0rCanineDistemperVirus byRea1．timeTaqManRT．PCR水 WANGJun—wei2．SUNCheng—yinf,JIANGPing1．WANGZhi—liang．ZHANGWei2 LILin2．ZHAOYong-ganf,WANGShan2．RENWei-3ii (IAnimalMedicineInstitute，NanjingAgricultureUniversity，Nanjing,210095； 2ChinaAnimalHeahhEpidemiology，Qingdao，266114) ABSTRACTObjective：DevelopaReal—timeTaqManRT—PCRtotestCDV samplesrapidlyandaccurately．Methods： SpecificprimernadprobeweredesignedandsynthesizedaccordingtOCDV N gene．Afteroptimization．aReal—timeTaqM na RT。- PCR wasestablished．Thenspecificitynadsensitiviyt testsweredonebydetectingCDV incellmedium，fiver，lung，brain，spleen， lymphnodenadnasal caviyt swab．Simultaneously，57clinicalsma pleswcrcdetectedbyReal—timeRT-PCR mehtodnadroutine RT-PCRwithBIOINDIST BIT RAPID CDV kit．Results：Powerfulfluoescencesi na dsmooht CD1WCweregainedwiht luL primerwiht aconcentrationof20pmol／mL nad0．3uLprobewiht aconcenrtationof20pmol／mL．Itisofhighsensitiviyt，testing RNA concenrtationas low as 1．24x10-ang／uL；naditisofhj