Ca＋离子对PLA2结构和功能的影响.PDF

第26卷第3期 应用化学 V01．26No．3 CHINESE 2009年3月 JOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY M盯．2009 Ca+离子对PLA2结构和功能的影响 刘淑清4 孙明忠¨ 赵宝昌8 (大连医科大学基础医学院。生物化学与分子生物学教研室；6生物技术系大连116044) 摘要从旅顺产白眉蝮蛇(Glyodius 质谱纯磷脂酶A：(GBB．PLA：)。采用电泳、质谱、等离子体发射光谱、紫外、荧光光谱测试技术对GBB．PLA：进 965．07 行了系统表征。HPLC．ESI．MS法测得的精确分子量为13 江浙蝮蛇和尖吻蝮蛇蛇毒PLA，的同源性蛋白，分别得到4个和1个同源性肽段。凝胶过滤、质谱和SDS． PAGE测试技术结果表明，GBB．PLA，以稳定的单体形式存在。电感耦合等离子体发射光谱分析法(ICP．AES) 提高3℃。 关键词磷脂酶A，，Ca2+离子，结构，功能 中图分类号：0629．8 文献标识码：A 文章编号：1000--0518(2009)03-0257-06 磷脂酶赴(PLA，，EC3．1．1．4)在蛇毒中含量极为丰富，特异性水解甘油磷脂上的2位脂酰键，生成 脂肪酸和溶血磷脂。PLA，是研究脂质和脂蛋白代谢、生物膜磷脂结构和神经生理的重要工具酶。因蛇 的种类及生活环境不同，PLA，的结构和功能差异很大[1。】。由于分布地域的局限性，尚没有关于旅顺产 子．金属离子可起到维持蛇毒蛋白的生物学活性和结构完整性的作用[4“】。本文首次从GBB蛇毒中得 的影响。 1实验部分 1．1仪器和试剂 GradiFrac层析系统(Phamacia公司)；LC packing nL C18色谱柱(NanoCl8，75岬×15 国Thermo Jarrel．Ash Finnigan)；Thermal 计(美国Kontron)，配有程序升温循环水浴；LDI．1700型质谱仪(Linear Bioworks搜索引擎完成。 MS质谱仪(美国Thermo公司)；蛋白质的鉴定采用TurboSequest G-75(G-75)填料、MonoQ柱、胰蛋 蛇毒购于旅顺蛇博物馆；DEAE．SephadexA-50(A．50)、Scphadex 白酶、二硫苏糖醇(Dithi汕reitoL／DrI-I．)、碘乙酰胺、碳酸氢铵(GEHealth公司)；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰 腈购自美国BrodickJohnson公司。 1．2实验方法 改进，纯化流程见图1。GBB．PLA：经A-50、G-75和MonoQ这3步柱层析制备得到。洗脱液选用％s． 2008-03．19收稿。2008-05-08修回 国家自然科学基金、大连医科大学高科技科研启动经费(2007030I)资助项目 通讯联系人：孙明忠，男，博士，教授；E-mail：mxs288@gmail．corn；研究方向：蛋白质结构与功能 万方数据 258 应用化学 第26卷 HCl缓冲体系，洗脱条件在图l各步骤中标出。PLA：的活性和蛋白质浓度测定采用卵黄法和Lowry 法‘21。 bBB奄… 1．2．2 S-300 SDS—PAGE和Sephacryl SDS．PAGE：采用质量分数分别为4％的浓 l cm×72