构建皮肤组织中特异表达匀孕灾员远鄄耘远基因的小鼠模型鄢.pdf

中国生物工程杂志摇 悦澡蚤灶葬月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁圆园员缘袁猿缘渊员园冤院圆苑鄄猿员 阅韵陨院员园援员猿缘圆猿辕躁援糟遭援圆园员缘员园园源 构建皮肤组织中特异表达匀孕灾员远鄄耘远 基因的小鼠模型鄢 员 员 员 圆 员 员鄢鄢 汤俊明 摇 赵彦平 摇 刘摇 奇 摇 盛青松 摇 吴黎明 摇 乔国洪 渊员宜兴市人民医院摇 宜兴摇 圆员源圆园园摇 圆 无锡市申瑞生物制品有限公司摇 无锡摇 圆员源圆园园冤 摘要摇 目的院构建特异在皮肤表达乳头瘤病毒渊匀孕灾员远冤耘远 基因的真核表达载体袁并鉴定其在转基 因小鼠体内的表达遥 方法院通过孕悦砸方法扩增皮肤特异启动子责陨晕灾及匀孕灾员远鄄耘远袁将以上片段通 过酶切连接袁插入去掉悦酝灾启动子的责糟阅晕粤猿援员渊原冤载体袁获得凿责糟阅晕粤猿援员渊原冤鄄责陨晕灾鄄耘远 载体曰 并显微注射制备其转基因小鼠袁利用砸栽鄄孕悦砸尧宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼及免疫组化技术检测获得的阳性小鼠 体内耘远 的表达水平遥 结果院凿责糟阅晕粤猿援员渊原冤鄄责陨晕灾鄄耘远 载体测序正确曰经鉴定猿员 只实验小鼠中袁 有圆 只小鼠携带外源基因袁将其与野生型小鼠交配获得的云员 代中又有圆 只阳性小鼠曰且在获得阳 性小鼠的皮肤组织中砸栽鄄孕悦砸检测有耘远 的转录本袁宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼 检测有耘远蛋白表达袁且免疫组化 检测结果显示有耘远 在皮肤表达且引起皮肤微增生遥 结论院成功构建了责陨晕灾鄄耘远 转基因模型小 鼠袁匀孕灾员远鄄耘远 基因在小鼠皮肤中特异表达袁为进一步研究匀孕灾员远鄄耘远 在癌症中的作用奠定了 基础遥 关键词摇 乳头瘤病毒渊匀孕灾冤摇 转基因小鼠摇 耘远 基因摇 特异表达 中图分类号摇 匝苑愿怨 摇 摇 匀孕灾渊澡怎皂葬灶责葬责蚤造造责皂葬增则蚤怎泽冤是孔多空病毒科乳头 性或细胞恶性转化作用是由于匀孕灾员远 的有关基因通过 瘤病毒属中的一种阅晕粤病毒遥 自员怨苑远年匀葬怎泽藻灶等首 影响宿主细胞抑癌基因表达产物生物活性来实现的遥 次从宫颈癌组织中分离出匀孕灾员远尧匀孕灾员愿 以来袁至今已 阅赠泽燥灶等咱缘暂 咱远暂 和宰藻则灶藻泽泽 等 分别于 员怨愿怨年尧员怨怨园年在 发现的匀孕灾有员园园多种类型咱员暂遥 大量分子流行病学研 杂糟蚤藻灶糟藻杂志上发表论文袁提出匀孕灾员远 产生的两个病毒 究资料表明袁人乳头瘤病毒 员远型渊匀孕灾员远冤与生殖道肿 蛋白袁即耘远尧耘苑蛋白可能分别捆绑并抑制宿主细胞内 瘤密切相关袁在宫颈癌活检组织中袁匀孕灾员远的阳性检出 的两个关键性的抗癌蛋白孕缘猿 和砸遭遥 在正常细胞内袁 率显著高于正常宫颈组织咱圆暂遥 动物致癌实验发现袁 孕缘猿 和砸遭调控细胞周期与凋亡袁孕缘猿与砸遭表达产物的 匀孕灾员远及其 耘远耘苑 基因可明显诱导小鼠宫颈癌的发 失活可导致宿主细胞永生化遥 耘远蛋白可能与孕缘猿表达 生咱猿暂遥 故普遍认为 匀孕灾员远 是宫颈癌发生的野高危冶型 产物结合而导致孕缘猿 降解失活袁继之使含 匀孕灾员远 的宿 人乳头瘤病毒遥 匀孕灾员远既可以其基因片段又可以整个 主细胞生长失控遥 阅晕粤形式整合到宿主细胞基因组中咱源暂遥 匀孕灾员远的基因 摇 摇 人外皮蛋白渊澡怎皂葬灶蚤灶增燥造怎糟则蚤灶袁澡陨晕灾冤是角质细胞 组至少有员园个开放阅读框袁而其早期的耘员耀耘苑 基因 角质化包膜的前体袁特异在分层的鳞状细胞上基层表 主要是维持病毒复制尧编码病毒蛋白和维持细胞内病 达遥 根据前人的研究袁我们选择澡陨晕灾上游调控序列的 毒高拷贝数遥 原圆源苑猿耀原员 区域为皮肤特异表达启动子遥 该启动子 摇 摇 许多研究表明袁匀孕灾员远及其基因组的致癌