猪瘟病毒RT—nested.PDFVIP

维普资讯 第 35卷 第 6期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．35 No．6 2007年 6月 JournalofNorthwestA ＆ FUniversity(Nat．Sci．Ed．) Jun．2007 猪瘟病毒 RT—nestedPCR检测方法的优化和应用 朱小甫 ，张 志 ，李晓成 ，陈德坤 ，吴旭锦 (1西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 712100；2中国动物卫生与流行病学 中心 ，山东 青 岛 266032) [摘 要] 为了优化猪瘟病毒的RT—nestedPCR检测方法 ，对福建省猪瘟流行情况进行 了调查 。根据 GenBank 上发表 的猪瘟病毒 Shimen株基因序列设计并合成了2对 引物 ，优化了猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)的 R nestedPCR检测方法 ，并对所优化 的RT-nestedPCR特异性进行了检验 。结果表明，该方法检测 CSFVcDNA含 量 的最低极限为 1×10 ng／mL，只有 CSFV扩增 出了272bp的 目的条带，从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪 流感病毒(SIV)、猪圆环病毒 2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒 (PPV)阳性毒和健康猪脾、肝组织及 阴性 PK一15细胞均未扩增 出特异性条带 ，说明该方法特异性强 。应用此方法对福建省 133份病料进行检测 ，结果有 6O份病料为阳性，阳性率为 45．1 。结果提示优化 的检测方法灵敏度高，特异性强；福建省猪群 CSFV感染率高，需 要加强 CSF预防控制工作 。 [关键词] 猪瘟病毒 ；RT-nestedPCR；检测方法 [中圈分类号] $852．65 1 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9387(2007)06—0011-04 OptimizationandapplicationofRT—nestedPCRdetectionfor classicaIswine fevervirus ZHUXiao—fu一，ZHANGZhi，LIXiao—cheng，CHENDe—kun ，WUXu—jin (1CollegeofAnimalScienceandTechnology，NorthwestA ＆ FUniversity，Yangling，Shaanxi712100，China； 2ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong266032，China) Abstract：InordertooptimizeofRT—nextedPCR detection methodforclassicalswinefevervirus，the prevalenceofclassicalswinefeverinFuJianprovincewasinvestigated．Twopairsofprimersweredesigned andsynthesizedtotestthesensitivityand specializationbyreferring to strainShimen，and themethodof detectionforCSFV wasoptimized．Theresultofsensitivityshowed thatthemostdilution cDNA ofCSFV was1×10 ng／mL，andthemethodcouldnotamplifyanybandfrom PRRSV，SIV，PCV2，PRV，PPV spleenandliverofhealth pigandnegativecontrolPK一15cellexceptCSFV ．which indicatedthattheRT_