血红蛋白氧载体抗氧化探究综述.docVIP

血红蛋白氧载体抗氧化探究综述非细胞型HBOCs的抗氧化研究 维持Hb的还原状态是保证其能够携带氧的前提条件，而维持其还原状态则有赖于Hb所处环境中有较高浓度的还原剂，较低浓度的氧化剂。石晓东等研究发现，当对红细胞裂解液进行微孔膜分离时，MetHb增加不多；但去除超氧化物歧化酶(SOD)等其他红细胞蛋白后再进行超滤膜浓缩Hb，出现较多的MetHb，说明抗氧化剂的能有效地降低MetHb的生成。在Hb溶液中和制备Hb的超滤过程中，谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、亚硫酸钠、维生素C都能保护Hb免被氧化[2]。无基质Hb（Stromafleehemoglobin,SFH）由于缺乏正常红细胞所具有的还原酶系（如SOD、过氧化氢酶CAT、MetHb还原酶等），Hb内的Fe2+容易氧化成Fe3+形成MetHb而失去携氧能力，并且还可产生自由基，尤其是在组织缺血再灌注时，可发生自由基的级联反应，造成组织的过氧化损伤；同时Hb释放的铁离子能促进细菌的生长，可能引起脓毒症等。因此，除了其他副作用和缺陷外，单从抗氧化的角度，SFH就不是理想的氧载体。 第一代HBOCs的研究主要是对Hb的化学修饰，主要包括Hb的分子内修饰（形成分子内交联Hb）、表面修饰（形成共轭Hb）、分子内与分子间的双重修饰（形成聚合Hb）等[3]。其主要目的稳定Hb的四聚体结构，增加分子量，延长半衰期；升高P50，降低Hb与氧的亲和力，利于组织细胞获得更多的氧。然而，这类修饰并没有提高Hb的抗氧化能力[4]，有些修饰反而促进了MetHb的形成。如多聚交联Hb的自氧化作用比未聚合交联Hb显著增强[5]；Sprung等[6]对55例手术患者在术中使用了不同剂量的HBOC-201(HemopureTM，Biopure公司生产的超纯化的戊二醛多聚牛Hb电解质平衡溶液)，发现术后血浆MetHb呈剂量依赖性升高。Oprime;HaraJF等[7]研究发现，HemAssistTM（DCLHb）在储存过程中，会随着时间和温度的增加，MetHb含量也明显增加。对大量失血患者使用大剂量的DCLHb治疗过程中发现血浆MetHb有不同程度的增加。尽管在这些研究中MetHb的增加在动物实验和初期临床试验中并没有引起明显的并发症，但是对患有严重疾病，尤其是危重病如多器官功能障碍综合症、缺血再灌注损伤等患者，由于复杂的病理生理环境（如自由基增加，过氧化状态，炎性介质的释放等）可能会加重病情或引起严重的并发症。 为了克服非细胞型HBOCs的自氧化缺陷，国内外学者开始了第二代HBOCs的研发，即在多聚的血红蛋白上交联抗氧化剂如SOD、CAT、硝基氧、GSH、水溶性维生素E类似物等，使多聚Hb具有抗氧化性。Chang等利用研发的交联SOD和CAT的聚合牛Hb（即PolyHb-SOD-CAT）对大鼠进行缺血再灌注研究，发现PolyHb-SOD-CAT对大鼠肝、肾再灌注具有较强的抗氧化性[8,9]。Powanda等[10]利用大鼠球形脑缺血再灌注模型，观察PolyHb-SOD-CAT的效果时，未发现明显的由氧自由基引发的再灌注损伤。我国杨懿铭等[11]采用戊二醛交联法制备的抗氧化酶交联的多聚Hb即PolyHb-SOD-CAT，测定不同温度、时间保存下制品MetHb的变化，发现在4℃、24℃不同保存时间均呈自氧化稳定，37℃、8小时显示比多聚Hb有更强的自氧化稳定性。说明交联了SOD、CAT的多聚Hb具有了抗氧化性，在一定程度上减轻了活性氧自由基的产生,并能抑制多聚Hb制备过程中MetHb的形成,减少Fe3+及血红素的析出。 以基因重组方法生产重组人Hb也是开发HBOCs的重要途径，Hoffman等[12]将Hb的alpha;和beta;基因构建于同一表达载体，使alpha;和beta;亚基在表达过程中即形成alpha;2beta;2四聚体。由此可以想象，将抗氧化剂如MetHb还原酶、SOD和（或）CAT的基因与Hb的alpha;和beta;基因构建于同一表达载体，将可能生产出具有较强抗氧化性的Hb。也有研究发现，人Hb的alpha;链上酪氨酸Y-42位是血红素产生自由基的关键部位[13]，可以用无反应活性的氨基酸取代Y-42位，认为可以有效减少氧自由基的产生。因此，重组蛋白工程也是阻止HBOCs被氧化的有效途径之一。 细胞型HBOCs的抗氧化研究 细胞型HBOCs是第三代血液代用品，主要特点是在Hb的外面用膜包覆，在结构上接近红细胞。早期的人工红细胞是用一薄层有机酯包裹Hb、2，3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）、CAT和碳酸酐酶等。由于半衰期非常短、毒性大，又发展了用脂质体为材料的亚微米人工红细胞脂质体包埋Hb，并进行了脂质体表面修饰，虽然半衰期明显延长，但MetHb的生成明