银染mRNA差异显示法的条件优化.PDF

( ) Ch in J N euro sci, 1999; V o l 15 2 : 151～ 155 151 技术方法 151 银染mRNA 差异显示方法的条件优化 1 梁德勇　王晓民 　崔振中　徐国恒　朱丽霞 　韩济生 (北京医科大学神经科学研究所　北京　100083; 1 中国中医研究院针灸研究所　北京　100700) 摘要　 差异显示技术是分离差异表达基因的强有力工具。本工作旨在优化无同位素的银染差异显示 mRNA 方法。以总 为模板, 用锚定引物与随机引物的组合进行 反应, 扩增产物在变性的聚丙烯 RNA R T PCR PCR 酰胺凝胶上电泳。用银染方法显示电泳 条带, 其结果是: ( 1) 加入量为 1～ 3 , 反应能扩 cDAN RNA g R T PCR 增出较多的 cDNA 条带, 而低于 0 5 g 时扩增条带数目较少; (2) 在 36～ 42 ℃的范围内, 随着温度的增加, 扩 增的条带减少; 而 42 ℃时扩增的条带数目锐减, 特别是当RNA 加入量小于 1 g 时几乎无条带显示; 36 ℃扩 增的条带过多而趋于 sm ear; ( 3) 优化了银染液程序, 染色液和显色液中 37% 甲醛的量分别为 0 03%～ 0 05% 和 0 075%～ 0 1% , 显色温度 4～ 12℃时, 显示出清晰的条带; (4) 用此方法获得数条电针镇痛有效与 无效大鼠表达差异的 cDNA 条带。总之, 通过改变参数条件, 优化了快速简便的银染mRNA 差异显示方法。 关键词　 差异显示　逆转录聚合酶链反应　银染　基因表达 mRNA OPTIM IZATION OF m RNA D IFFERENTIAL D ISPLAY W ITH SIL VER STA IN ING 1 , , , , , L IAN G D e Yong W AN G X iao M in CU I Zhen Zhong XU Guo H eng ZHU L i X ia HAN J i Sheng (N eu roscience R esearch Institu te , B eij ing M ed i